目的:以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,体外探讨高糖微环境对小鼠巨噬细胞极化的影响,并阐明miR-125b的调控作用.方法:RAW264.7细胞分为正常对照(NG)组、正糖抑制(NG+miR-125b inhibitor)组、高糖刺激(HG)组和高糖抑制(HG+miR-125b inhibitor)组,进行相应的干预处理.各组细胞体外培养72 h后留取细胞及上清,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中M1/M2极化相关因子mRNA和miR-125b表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞上清中M1/M2极化相关细胞因子水平,流式细胞术检测M1/M2极化表面标记物CD86(M1标记)和CD206(M2标记)阳性表达率.通过miR-125b inhibitor沉默细胞中miR-125b的表达,进一步采用RT-qPCR和Western blotting法检测各组细胞中M1/M2极化相关因子干扰素调节因子4(IRF4)、干扰素调节因子5(IRF5)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)mRNA及蛋白水平表达.结果:高糖处理72 h后,与NG组比较,HG组细胞中白细胞介素10(IL-10)mRNA表达水平和细胞上清中IL-10水平明显降低(P<0.01),白细胞介素1β(IL-1β)和Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平明显升高(P<0.01),细胞上清中IL-1β、IL-12和IL-6水平明显升高(P<0.01).与NG组比较,HG组细胞中CD86阳性表达率明显升高(P<0.05),CD206阳性表达率明显降低(P<0.05),miR-125b表达水平明显升高(P<0.01).采用miR-125b inhibitor沉默miR-125b表达后,分别与NG和HG组比较,NG+miR-125b inhibitor组和HG+miR-125b inhibitor组细胞中miR-125b表达水平均明显降低(P<0.01),细胞中IL-10 mRNA表达水平和细胞上清中IL-10水平升高(P<0.01),细胞中IL-1β和TLR4 mRNA表达水平及细胞上清中IL-12、IL-6和IL-1β水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞中CD86阳性表达率降低(P<0.05或P<0.01),CD206阳性表达率升高(P<0.01).与NG组比较,HG组细胞中IRF4和PPAR mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),IRF5 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01);沉默miR-125b表达后,与NG组比较,NG+miR-125b inhibitor组细胞中IRF4和PPAR mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.01),IRF5 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与HG组比较,HG+miR-125b inhibitor组细胞中IR4和PPAR mRNA及蛋白水平明显降低(P<0.01),IRF5 mRNA表达水平明显降低(P<0.01).结论:高糖刺激可以诱导巨噬细胞向促炎M1表型极化,同时miR-125b表达水平明显升高,沉默miR-125b表达可部分逆转高糖刺激诱导的巨噬细胞向促炎M1表型的极化,该过程可能是通过上调IRF4和PPAR及下调IRF5实现的.

糖尿病;高糖;微炎症;巨噬细胞;miR-125b

沈鑫;刘洋;陈泓宇;张洁;程庆砾;杨光

解放军总医院第二医学中心肾脏病科 国家老年医学研究中心,北京 100853

吉林大学学报（医学版）

[1]沈鑫;刘洋;陈泓宇;张洁;程庆砾;杨光-.高糖通过miR-125b对小鼠RAW264.7巨噬细胞极化的调控作用)[J].吉林大学学报（医学版）,2022(04):847-857

NG+miR,IR4

125b,RAW264,巨噬细胞极化,单核巨噬细胞,巨噬细胞系,高糖微环境,小鼠巨噬细胞,正常对照,inhibitor,HG+miR,细胞体,体外培养,留取,上清,qPCR,M1,M2,相关因子,酶联免疫吸附测定,细胞因子水平,流式细胞术,标记物,CD86,CD206,阳性表达率,blotting,干扰素调节因子,IRF4,IRF5,过氧化物酶体增殖物激活受体,PPAR,蛋白水平表达,Toll,样受体,TLR4,蛋白表达水平,促炎,表型极化,微炎症

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