背景 微RNA(microRNA)是一种内源性非编码RNA,在生命活动的各个方面都拥有不可忽视的地位,尤其在骨改建中发挥着重要作用.其中,miR-134-5p及其靶基因整合素β1(integrinβ1,Itgb1)在破骨细胞中发挥的相互作用尚未见报道.目的 研究miR-134-5p靶向Itgb1对小鼠破骨细胞形成的影响.方法 诱导小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)分化为破骨细胞,用TRAP染色观察破骨细胞形态,并通过qRT-PCR检测BMMs向破骨细胞分化的过程中破骨相关基因TRAP、CTSK、NFATc1以及miR-134-5p的表达水平变化.实验分为过表达miR-134-5p组(agomir)、敲低miR-134-5p组(antagomir)及其相应对照组(agomir NC和antagomir NC),将其分别转染入BMMs中,qRT-PCR检测转染效率后,对各组进行破骨细胞TRAP染色和肌动蛋白环(F-actin)染色观察细胞形态,同时检测破骨相关基因TRAP、CTSK、NFATc1的表达水平;通过生物信息学网站筛选出miR-134-5p可能的靶基因Itgb1,qRT-PCR和Western blot检测Itgb1基因表达.结果 与诱导1 d后的BMMs细胞相比,BMMs诱导分化7 d后TRAP染色阳性的破骨细胞形成增多,破骨相关基因TRAP、CTSK、NFATc1表达水平升高(P<0.01),同时qRT-PCR检测结果提示miR-134-5p表达水平降低(P<0.01);转染agomir后BMMs在体外向破骨细胞的分化受到抑制,TRAP染色阳性的破骨细胞数目减少,荧光下肌动蛋白环数目也减少,且TRAP、CTSK、NFATc1基因表达水平降低(P<0.01);而转染antagomir后促进BMMs细胞向破骨细胞分化表现为TRAP染色阳性的破骨细胞数目增加,肌动蛋白环数目同样增加,且TRAP、CTSK、NFATc1基因表达水平升高(P<0.01).通过生物信息学网站筛选,miR-134-5p与Itgb1基因在其3-UTR端存在结合位点,qRT-PCR和Western blot检测均显示上调miR-134-5p时Itgb1表达降低.结论 miR-134-5p通过靶向Itgb1在破骨细胞形成中发挥抑制作用.

破骨细胞;微RNA;miR-134-5p;整合素β1;骨改建

黄萌;江小霞;崔建通;赵长铭;王振宁;张宇;吴丽丽;孙兆峰;徐璐璐

解放军总医院研究生院,北京 100853;解放军总医院第一医学中心 口腔正畸科,北京 100853;军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所,北京 100039

解放军医学院学报

[1]黄萌;江小霞;崔建通;赵长铭;王振宁;张宇;吴丽丽;孙兆峰;徐璐璐-.骨改建中miR-134-5p通过靶向Itgb1抑制小鼠破骨细胞形成的研究)[J].解放军医学院学报,2022(01):67-74

Itgb1

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