目的 探讨miR-let-7 c-3 p/早期生长反应因子-1(Egr-1)信号轴在白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化中的作用与分子机制.方法 人慢性髓系白血病K562细胞分别用100μg/L佛波酯(PMA,实验组)和0μg/L PMA(对照组)溶液向单核/巨噬细胞定向诱导分化48 h后,通过细胞形态学观察和流式细胞仪测定分化抗原,确定分化模型的成功建立;采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测白血病细胞分化前后Egr-1和miR-let-7c-3p的表达变化,蛋白质印迹法检测Egr-1蛋白表达变化;siRNA干扰实验检测Egr-1对细胞分化的影响,设PMA+si-Egr-1组和PMA+si-Ctrl组;双荧光素酶结合实验检测miR-let-7 c-3 p与Egr-1的3′UTR靶向结合和活性调控关系,用Egr-1-wt野生质粒、Egr-1-mut突变质粒和miR-let-7 c-3 p mimics或NC mimics共转染细胞,设置miR-let-7 c-3 p mimics+Egr-1-wt、miR-let-7 c-3 p mimics NC+Egr-1-wt、miR-let-7c-3p mimics+Egr-1-mut和miR-let-7c-3p mimics NC+Egr-1-mut组;通过细胞转染miR-let-7c-3p mimics和inhibitor调控miRNA表达,设置阴性对照序列(miR-let-7c-3p mimics NC和miR-let-7c-3p inhibitor NC),qRT-PCR验证调控效果;蛋白质印迹法检测miR-let-7c-3p对Egr-1的表达影响;流式细胞术检测miR-let-7c-3p对PMA诱导的K562细胞分化抗原的影响.结果 经过PMA体外诱导后,与对照组比较,实验组K562细胞增殖水平升高(0.85±0.03 vs 0.46±0.03;t=16.050,P<0.001),CD11b阳性表达量升高〔(49.47±3.48)％vs(3.54±0.54)％;t=24.070,P=0.002〕,CD14阳性表达量也升高〔(59.84±5.26)％vs(6.79±0.66)％;t=16.670,P=0.004〕.与对照组比较,实验组Egr-1基因和蛋白表达水平升高,miR-let-7c-3p基因表达量降低,差异有统计学意义,均P<0.001.siRNA干扰实验结果显示,PMA+si-Egr-1组CD14分化抗原表达水平低于PMA+si-Ctrl组〔(7.03±1.45)％vs(24.40±4.70)％;t=6.113,P=0.004〕.双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-let-7c-3p mimics+Egr-1-wt组的荧光素酶活性低于miR-let-7c-3p mimics NC+Egr-1-wt组(0.77±0.006 vs 1.00±0.008;t=27.582,P<0.001).蛋白质印迹法检测结果显示,K562细胞转染miR-let-7c-3p inhibitor后,Egr-1蛋白表达水平高于miR-let-7c-3p inhibitor NC组(0.83±0.12 vs 0.39±0.00;t=-6.416,P=0.003);转染miR-let-7c-3p mimics后,Egr-1蛋白表达水平低于miR-let-7c-3p mim-ics NC组(0.18±0.01 vs 0.48±0.06;t=8.421,P=0.001).在miR-let-7c-3p对100μg/L PMA诱导K562细胞分化48 h的实验中,与0μg/L PMA组比较,100μg/L PMA可以诱导K562细胞分化抗原CD11b升高,分别为(3.44±0.43)％和(45.14±1.40)％,100μg/L PMA诱导K562细胞的同时转染miR-let-7c-3p inhibitor NC和miR-let-7c-3p in-hibitor后,2组分化抗原CD11b分别为(43.91±1.00)％和(59.22±1.28)％,4组间CD11b表达水平差异有统计学意义,F=1460.318,P<0.001.与0μg/L PMA组比较,100μg/L PMA同样诱导K562细胞的CD14表达升高,分别为(4.91±0.42)％和(70.54±1.45)％,100μg/L PMA共转染miR-let-7c-3p inhibitor NC或miR-let-7c-3p inhibitor后,CD14表达水平分别为(71.91±0.75)％和(85.98±0.52)％,4组间CD14表达水平差异有统计学意义,F=5163.346,P<0.001.结论 miR-let-7c-3p可与Egr-1的3′UTR结合,并且可以靶向调控其表达水平变化.miR-let-7c-3p/Egr-1信号轴是白血病细胞定向分化为单核/巨噬细胞的重要途径之一.

K562细胞;细胞分化;miR-let-7c-3p;早期生长反应因子-1;巨噬细胞

齐福;王希娣;王朝喆;孙瑞婧;都鹏超;王静;姜国胜

滨州医学院基础医学院免疫学教研室,山东 烟台 264003;济宁医学院附属济南市章丘区人民医院精准医疗实验室,山东 济南 250200;山东银丰生命科学研究院免疫治疗中心,山东 济南 250102

中华肿瘤防治杂志

[1]齐福;王希娣;王朝喆;孙瑞婧;都鹏超;王静;姜国胜-.miR-let-7c-3p靶向Egr-1调控白血病细胞定向单核/巨噬细胞分化的机制研究)[J].中华肿瘤防治杂志,2022(08):554-563

PMA+si,mimics+Egr,NC+Egr

let,7c,3p,巨噬细胞分化,早期生长,慢性髓系白血病,K562,佛波酯,诱导分化,过细,细胞形态学,形态学观察,流式细胞仪,分化抗原,实时定量聚合酶链反应,qRT,表达变化,蛋白质印迹法,siRNA,干扰实验,实验检测,Ctrl,UTR,活性调控,wt,质粒,mut,变质,共转染,细胞转染,inhibitor,miRNA,调控效果,流式细胞术,体外诱导,CD11b,阳性表达,CD14,蛋白表达水平,基因表达量,双荧光素酶报告基因实验,荧光素酶活性,靶向调控,表达水平变化

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