目的:探究miR-27a对胃癌细胞AGS增殖与侵袭能力的影响,并进一步探讨能否靶向调控盐诱导激酶 1(salt induce kinase 1,SIK1)和 F 框/WD_40域蛋白7(F-box and WD_40 repeat domain protein 7,FBXW7).方法:利用TCGA数据库分析胃癌组织与邻近正常胃组织之间miR-27a表达水平的差异;利用脂质体LipofectamineTM2000将miR-27 a mimics和miR-27a NC转入AGS细胞中,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-27a的表达,CCK-8实验检测细胞增殖活力,细胞平板克隆形成实验检测细胞克隆能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力.生物信息学预测miR-27a的靶基因,通过蛋白印迹实验验证miR-27a对SIK1的调控作用;通过双荧光酶素报告基因、Real-time PCR和蛋白印迹实验验证miR-27a对FBXW7的调控作用.利用TCGA数据库分析胃癌组织与邻近正常胃组织之间FBXW7 mRNA表达水平的差异,分析FBXW7 mRNA表达水平与胃癌患者5年生存率的关系.结果:TCGA数据库分析表明miR-27a在胃癌组织中的表达高于邻近正常胃组织.Real-time PCR表明miR-27a在模拟物组中的表达较对照组高,细胞功能实验表明过表达miR-27a能促进胃癌细胞的增殖与侵袭能力;TargetScan预测SIK1为miR-27a的潜在靶基因,蛋白印迹实验表明SIK1不能被miR-27a靶向负性调控.TargetScan预测FBXW7为miR-27a的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因结果表明miR-27a可抑制FBXW7 3'UTR双荧光素酶活性,突变其结合位点后抑制作用消失.Real-time PCR和蛋白印迹实验表明过表达miR-27a后FBXW7的蛋白与mRNA表达均明显下调.TCGA数据库分析表明胃癌组织中FBXW7 mRNA的表达较邻近正常胃组织明显下降,FBXW7 mRNA表达低的组胃癌患者5年生存率更低.结论:过表达miR-27a能增强胃癌细胞AGS的增殖与侵袭能力,可能是通过负性调控FBXW7发挥的促瘤作用.在胃癌细胞AGS中,SIK1不能被miR-27a负性调控,可能被FBXW7靶向介导泛素化降解.

miR-27a;TCGA;盐诱导激酶1;F框/WD_40域蛋白7;胃癌细胞;增殖;侵袭

杨剑洋;贺德;李志坚;纪周新;马广念

南方医科大学第二临床医学院,广东 广州 510280;南方医科大学附属宝安区人民医院普通外科,广东 深圳 518101

现代肿瘤医学

[1]杨剑洋;贺德;李志坚;纪周新;马广念-.miR-27a促进胃癌细胞AGS增殖与侵袭及其机制探讨)[J].现代肿瘤医学,2022(12):2129-2135

SIK1

miR,27a,胃癌细胞,AGS,增殖与侵袭,机制探讨,靶向调控,控盐,salt,induce,kinase,WD,box,repeat,domain,protein,FBXW7,TCGA,数据库分析,胃癌组织,胃组织,脂质体,LipofectamineTM2000,mimics,NC,转入,实时定量聚合酶链反应,Real,CCK,实验检测,细胞增殖活力,克隆形成,细胞克隆,Transwell,细胞侵袭能力,靶基因,蛋白印迹实验,胃癌患者,细胞功能实验,过表达,细胞的增殖,TargetScan,负性调控,双荧光素酶报告基因,可抑制,UTR,荧光素酶活性,结合位点,促瘤,泛素化

0.198813