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DNA甲基化通过调控细胞自噬影响家蚕翅的发育
文献摘要：
[目的]本研究旨在探索DNA甲基化是否通过调控细胞自噬进而影响家蚕Bombyx mori翅的发育.[方法]分别用1和2 μg DNA甲基化特异性抑制剂5-aza-dC处理家蚕卵巢Bm12细胞和家蚕预蛹,荧光显微镜下观察Bm12细胞的数量,利用dot blot检测Bm12细胞中DNA甲基化水平,利用溶酶体染色检测细胞自噬强度;利用RT-qPCR检测细胞自噬相关蛋白(Agt)基因的表达水平;利用Western blot和免疫组化定性检测Bm12细胞中自噬标记物LC3蛋白的分型情况;观察成虫的翅表型并计算残翅率和翅面积.用2 μg细胞自噬激活剂SMER28处理家蚕预蛹,以及采用自噬抑制剂Spautin-1(2μg)挽救5-aza-dC(2μg)处理后的家蚕预蛹,利用溶酶体染色检测翅细胞内自噬强度,观察翅表型并计算残翅率和翅面积.[结果]1 μg 5-aza-dC处理后12,24和48 h抑制了 Bm12细胞的生长,使Bm12细胞甲基化水平降低,Bm12细胞自噬水平升高;处理后48 h Bm12细胞中Atg基因表达上调.家蚕预蛹期注射2μg5-aza-dC后24,48和72 h,成虫翅细胞内自噬水平升高,Atg基因的表达上调,出现大量畸形翅并且残翅率升高72.62％和翅表面积减少66％.家蚕预蛹期注射2μg SMER28 24,48和72 h后,成虫翅细胞内自噬水平升高,成虫出现大量畸形翅,残翅率升高75.13％和翅表面积减少48.79％.利用Spautin-1对5-aza-dC处理的预蛹进行挽救实验,结果显示细胞自噬抑制可以缓解DNA去甲基化对成虫翅发育的影响.[结论]本研究结果证明DNA甲基化通过调节细胞自噬在家蚕翅发育中发挥作用.本研究结果为DNA甲基化调控昆虫发育提供了实验依据.
文献关键词：
家蚕;DNA甲基化;翅;细胞自噬;发育调控
中图分类号：
作者姓名：
龚程程;吕浩;郑思春;徐关峰
作者机构：
华南师范大学生命科学学院,广东省昆虫发育生物与应用技术重点实验室,广州510631
文献出处：
引用格式：
[1]龚程程;吕浩;郑思春;徐关峰-.DNA甲基化通过调控细胞自噬影响家蚕翅的发育)[J].昆虫学报,2022(02):119-129
A类：
Bm12,SMER28,Spautin,g5,翅发育
B类：
细胞自噬,家蚕,Bombyx,mori,aza,dC,理家,蚕卵,预蛹,荧光显微镜,显微镜下,dot,blot,甲基化水平,溶酶体,qPCR,自噬相关蛋白,Agt,免疫组化,定性检测,标记物,LC3,成虫,激活剂,自噬抑制剂,挽救,平降,Atg,蛹期,去甲基化,昆虫,发育调控
AB值：
0.200947
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