典型文献
昆虫双杂交实验中家蚕BmHSP83和BmMAD3蛋白引起的假性现象
文献摘要：
昆虫双杂交(Insect two-hybrid,I2H)技术是研究昆虫细胞蛋白质相互作用的一种方法.本研究利用Gateway克隆技术,构建了家蚕Bombyx mori蛋白BmHSP83和BmPDIA5,以及BmMAD3和BmMAN1的I2H载体;然后,将载体与报告质粒pUAS-Luc一起转染SF-9细胞,检测其发光值.结果表明,转染pIE2-AD-BmHSP83或pIE2-AD-BmMAD3载体与转染pUAS-Luc的对照组的细胞发光值无明显差异,报告基因未被激活;分别单独用pIE2-DBD-BmHSP83或pIE2-DBD-BmMAD3质粒转染细胞时,发光强度显著增加,报告基因被激活,说明BmHSP83和BmMAD3造成了假阳性结果;并且当细胞共转染pIE2-DBD-BmHSP83和pIE2-AD-BmPDIA5、pIE2-DBD-BmMAD3和pIE2-AD-BmMAN1时报告基因的激活反应显著提高,提示BmHSP83与BmPDIA5、BmMAD3与BmMAN1存在互作关系从而引起阳性反应,且与BmHSP83和BmMAD3的假阳性形成叠加效应;然而,当共转染pIE2-AD-BmHSP83和pIE2-DBD-BmPDIA5、pIE2-AD-BmMAD3和pIE2-DBD-BmMAN1时报告基因未被激活,显示pIE2-AD-BmHSP83/BmMAD3导致了假阴性.BmHSP83和BmMAD3引起I2H假性现象可能与该二种蛋白具有转录激活功能有关,当其与DNA结合结构域(DNA binding domain,DBD)融合表达时,该融合体即具备了DNA结合及转录激活两个功能,因而可以启动下游报告基因的表达;反之,当其与转录激活结构域(AD)融合表达时,则阻止了他们各自与BmPDIA5、BmMAN1蛋白的互作.本研究结果为那些利用I2H体系研究具有转录激活功能的蛋白质相互作用提供借鉴.
文献关键词：
昆虫双杂交;假性;家蚕;HSP83;MAD3
中图分类号：
作者姓名：
方康;彭海涛;胡琼波
作者机构：
华南农业大学植物保护学院, 广州510642
文献出处：
引用格式：
[1]方康;彭海涛;胡琼波-.昆虫双杂交实验中家蚕BmHSP83和BmMAD3蛋白引起的假性现象)[J].环境昆虫学报,2022(01):170-176
A类：
昆虫双杂交,BmHSP83,BmMAD3,I2H,BmPDIA5,BmMAN1,pUAS,pIE2,HSP83,MAD3
B类：
杂交实验,家蚕,假性,Insect,two,hybrid,昆虫细胞,蛋白质相互作用,研究利用,Gateway,克隆技术,Bombyx,mori,Luc,SF,报告基因,独用,DBD,质粒转染,发光强度,假阳性,共转染,时报,互作关系,阳性反应,叠加效应,假阴性,二种,种蛋,转录激活,结合结构,结构域,binding,domain,融合表达,融合体,反之,活结
AB值：
0.174745
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