典型文献
T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库的构建
文献摘要：
为筛选遗传背景清晰、裂解性能优良、宿主识别谱广泛的噬菌体用于抗菌产品开发,满足畜禽减抗、无抗养殖需求,通过易错PCR技术定向改变T7噬菌体尾丝蛋白羧基末端基因序列,并构建T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库,为筛选识别不同宿主的T7噬菌体奠定基础.提取T7噬菌体基因组,用SfiⅠ进行单酶切,回收SfiⅠ位点左侧基因组.常规PCR扩增尾丝蛋白羧基末端基因序列(TF-ct,约350 bp)以及gene17至T7基因组右侧末端基因序列(约4000 bp).以回收的TF-ct片段为模板,进行易错PCR扩增,将随机突变的TF-ct基因片段连接T载体,构建质粒文库.从质粒文库中用SfiⅠ/SphⅠ双酶切出TF-ct片段,并与SfiⅠ位点左侧基因组片段、gp17右侧基因组片段进行连接,利用包装蛋白拯救出T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库.结果易错PCR成功扩增TF-ct基因片段,并连接T载体构建质粒文库;同时随机突变的基因正确插入T7噬菌体基因组相应位置,成功拯救出尾丝蛋白定向进化T7噬菌体文库.从噬菌体文库中随机挑选15个克隆进行序列分析,目的基因的突变率在1.23％～2.16％;尾丝蛋白loop区域的氨基酸突变改变了T7噬菌体吸附宿主的能力.本研究成功构建T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库,验证了loop区域在T7噬菌体识别宿主过程的作用,为后续筛选有益噬菌体开发抗菌产品提供支撑.
文献关键词：
T7噬菌体;尾丝蛋白;随机进化;宿主识别
中图分类号：
作者姓名：
洪伟鸣;李睿婷;郭子杰;徐海;左伟勇;张亮;宋亮
作者机构：
江苏农牧科技职业学院 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏 泰州 225300
文献出处：
引用格式：
[1]洪伟鸣;李睿婷;郭子杰;徐海;左伟勇;张亮;宋亮-.T7噬菌体尾丝蛋白随机进化文库的构建)[J].浙江农业学报,2022(12):2640-2647
A类：
尾丝蛋白,随机进化,Sfi,gene17,Sph,gp17
B类：
T7,噬菌体,文库,遗传背景,性能优良,宿主识别,体用,产品开发,畜禽,减抗,无抗养殖,易错,羧基,端基,基因序列,不同宿主,TF,ct,bp,质粒,双酶,切出,拯救,救出,载体构建,定向进化,序列分析,目的基因,突变率,loop,氨基酸突变
AB值：
0.152892
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