典型文献
基于PiggyBac转座系统构建稳定表达ABEmax基因的HEK293T细胞系
文献摘要：
目的:使用PiggyBac(PB)转座系统在HEK293T细胞中敲入腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因,构建稳定表达ABEmax基因的工具细胞系.方法:根据PB转座原理,将ABEmax基因和抗生素筛选基因以同源重组的方法插入到PB质粒内,构建pPB-ABEmax真核重组表达质粒.将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中,利用嘌呤霉素抗性筛选细胞,流式细胞仪分选单克隆细胞.单细胞扩增培养后,利用PCR鉴定ABEmax基因的插入水平,RT-qPCR鉴定ABEmax的表达水平以及利用sgRNA测试工具细胞的编辑水平.结果:成功构建pPB-ABEmax真核重组表达质粒,筛选出特异性插入ABEmax基因的HEK293T细胞系,HEK293T-ABEmax的基因编辑效率与HEK293T细胞转染Test-sgRNA与ABEmax的对照组无统计学差别(P>0.05).结论:利用PiggyBac基因编辑技术成功构建并获得了腺嘌呤碱基编辑工具ABEmax基因稳定表达细胞系.
文献关键词：
PiggyBac转座系统;碱基编辑;ABEmax;细胞系
中图分类号：
作者姓名：
张璐;安莉莎;金孝华;马旭
作者机构：
国家卫生健康委科学技术研究所 北京,100081;国家人类遗传资源中心
文献出处：
引用格式：
[1]张璐;安莉莎;金孝华;马旭-.基于PiggyBac转座系统构建稳定表达ABEmax基因的HEK293T细胞系)[J].中国计划生育学杂志,2022(07):1472-1475
A类：
ABEmax,pPB
B类：
PiggyBac,转座,系统构建,HEK293T,腺嘌呤,碱基编辑,同源重组,重组表达,重组质粒,嘌呤霉素,抗性筛选,流式细胞仪,分选,选单,单克隆细胞,单细胞扩增,扩增培养,qPCR,sgRNA,测试工具,编辑效率,细胞转染,Test,基因编辑技术,稳定表达细胞系
AB值：
0.229778
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
