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DNA甲基转移酶1的表达对小鼠精原干细胞分化的影响
文献摘要：
目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达对小鼠精原干细胞(SSC)分化的影响.方法:采用两步酶消化法从1周龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织中分离获取SSC,将DNMT1-siRNA、siRNA阴性对照(NC-siRNA)转染入分离纯化后第三代SSC,分别命名为DNMT1-Si组、DNMT1-NC组,另取未转染细胞命名为对照组;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western印迹检测转染24 h后各组DNMT1 mRNA和蛋白表达水平,并检测转染后细胞基因组甲基化水平.干细胞生长因子诱导SSC向精母细胞方向分化,采用RT-qPCR法和Western印迹检测诱导分化48 h生殖细胞增殖相关蛋白(Nanos2)、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、维甲酸刺激蛋白(Stra8)mRNA和蛋白表达水平.结果:转染24 h后,DNMT1-Si组DNMT1 mRNA(0.13±0.03)和蛋白相对表达量(0.44±0.08)、DNA 甲基化水平[(14.16±2.62)％]均低于对照组[0.94±0.08、1.21±0.11、(27.15±3.54)％]和 DNMT1-NC 组[0.93±0.09、1.19±0.10、(26.85±3.55)％,P＜0.05],对照组与 DNMT1-NC 组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).分化48 h后,与 对照组和DNMT1-NC组比较,DNMT1-Si组Nanos2、PLZF mRNA和蛋白相对表达量降低,Stra8 mRNA和蛋白相对表达量升高(P＜0.05);对照组与DNMT1-NC组Nanos2、PLZF、Stra8 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:敲低DNMT1可促进小鼠SSC向精母细胞方向分化,其机制可能与降低基因组甲基化水平,抑制Nanos2、PLZF表达,促进Stra8表达有关.
文献关键词：
DNA甲基转移酶1;精原干细胞;分化;小鼠
中图分类号：
作者姓名：
李娜;苗聪秀;毕慧玲;苗卉;李丹;李敏
作者机构：
长治医学院附属和平医院生殖遗传科/山西省卫健委生殖工程委级重点实验室/长治医学院生殖遗传研究所,山西长治046000
文献出处：
引用格式：
[1]李娜;苗聪秀;毕慧玲;苗卉;李丹;李敏-.DNA甲基转移酶1的表达对小鼠精原干细胞分化的影响)[J].中华男科学杂志,2022(05):395-401
A类：
Nanos2
B类：
甲基转移酶,精原干细胞,细胞分化,DNMT1,SSC,两步,酶消化法,周龄,BALB,雄性小鼠,睾丸组织,siRNA,NC,转染,分离纯化,第三代,Si,qPCR,蛋白表达水平,甲基化水平,干细胞生长因子,精母细胞,诱导分化,生殖细胞,早幼粒细胞,粒细胞白血病,锌指蛋白,PLZF,维甲酸,酸刺激,Stra8,白相,相对表达量,敲低
AB值：
0.214251
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