目的 探讨邻苯二甲酸单乙基己基酯[mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP]对小鼠睾丸间质(TM-3)细胞线粒体自噬的影响.方法 将对数生长期的TM-3细胞分别暴露于自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)(0、0.25、0.5、1.0、1.25、1.5 mmol·L-1)24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力,确定后续3-MA干预组染毒剂量;培养TM-3细胞,设置对照组、MEHP低、中、高剂量组(200、400、800μmol·L-1)和抑制剂组(MEHP中剂量+3-MA 1.0 mmol·L-1).化学发光法检测细胞腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)水平;荧光探针JC-1法检测细胞线粒体膜电位(MMP)水平;免疫印迹法(Western blot)检测抗增殖蛋白2(PHB2)、同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PINK1)、帕金森蛋白(Parkin)、P-Parkin蛋白表达水平.结果 与对照组相比,3-MA浓度为1.0 mmol·L-1时,细胞存活率为(99.56±2.51)％(P>0.05),确定抑制剂组3-MA干预浓度为1.0 mmol·L-1.与对照组相比,MEHP中剂量组细胞存活率降低,各染毒组TM-3细胞ATP水平均下降(P均<0.05),中、高剂量组TM-3细胞MMP水平、Parkin蛋白表达水平均下降(P均<0.05),各染毒组PHB2、PINK1、P-Parkin蛋白表达均增高(P均<0.05);与低剂量组相比,高剂量组TM-3细胞的ATP水平下降(P<0.05),中、高剂量组TM-3细胞线粒体膜电位水平下降,PHB2、PINK1、P-Parkin蛋白相对表达水平均上升(P均<0.05),Parkin蛋白相对表达水平下降(P均<0.05);与中剂量组相比,抑制剂组细胞存活率降低(P<0.05),高剂量组、抑制剂组细胞ATP水平、线粒体膜电位水平均降低(P均<0.05),高剂量组TM-3细胞中PHB2、PINK1、P-Parkin蛋白相对表达水平均上升(P均<0.05),Parkin蛋白相对表达水平下降(P<0.05);抑制剂组PHB2、PINK1、P-Parkin蛋白的相对表达水平均低于中剂量组(P均<0.05),Parkin蛋白的表达水平高于中剂量组(P<0.05).结论 MEHP可通过激活PINK1/Parkin信号通路来诱导TM-3细胞线粒体自噬.

线粒体自噬;邻苯二甲酸单-2-乙基己基酯;PINK1/Parkin信号通路;小鼠睾丸间质细胞

宁夏医科大学公共卫生与管理学院职业卫生与环境卫生学系,银川 750004;宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室,银川 750004;生育力保持教育部重点实验室,银川 750004

[1]宋贝贝;李玲;德小明;李丽萍;黄金瑞;郭晓英;马慧颖-.基于PINK1/Parkin信号通路研究MEHP对小鼠睾丸间质细胞线粒体自噬的影响)[J].宁夏医科大学学报,2022(05):438-443

同源性磷酸酶张力蛋白

PINK1,Parkin,MEHP,小鼠睾丸间质细胞,线粒体自噬,邻苯二甲酸,乙基,mono,ethylhexyl,phthalate,TM,对数生长期,自噬抑制剂,MA,CCK,细胞活力,染毒,毒剂,高剂量,+3,化学发光法检测,腺嘌呤核苷三磷酸,ATP,荧光探针,JC,线粒体膜电位,MMP,免疫印迹法,blot,抗增殖蛋白,PHB2,帕金森,蛋白表达水平,细胞存活率,白相,相对表达

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