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新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素修饰位点研究
文献摘要：
目的:建立新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素(PEG-rhGH)修饰位点的研究方法,为该类新型修饰技术产物的质量评价提供依据.方法:采用MALDI-TOF质谱分析修饰产物中聚乙二醇(PEG)的修饰个数及修饰肽段的质量数;采用LC-Q-TOF质谱分析修饰位点,分析色谱柱为UPLC色谱柱(Pro-tein ACQUITY BEH C4 Column,150 mm×2.1 mm,1.7 μm,300?),以0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈溶液为流动相,进行梯度洗脱,柱温为40℃.质谱数据采集条件为MSE模式,一级质谱能量4 eV,二级碎裂电压30～55 eV.结果:修饰蛋白中PEG的平均相对分子质量为30 000,并且每个PEG-rhGH分子中仅存在1个PEG修饰;原型蛋白重组人生长激素中第134位精氨酸被替换为赖氨酸,且该赖氨酸的ε-氨基与连接子HOOC-O-CH2-CH2-N3中的羧基端共价结合,连接子另一端的叠氮基团与活化后的PEG偶联后生成修饰产物.结论:联合运用多种质谱技术,通过比对人生长激素国家对照品、原型蛋白与修饰蛋白的酶切肽图谱及对特定肽段的一级、二级碎片的分子量分析,可以确定新型定点修饰的PEG-rhGH的修饰位点.
文献关键词：
聚乙二醇化重组人生长激素;聚乙二醇化;重组人生长激素;定点修饰;基质辅助及激光解吸-飞行时间质谱;四极杆-飞行时间质谱
中图分类号：
作者姓名：
李晶;邵正康;胡馨月;李懿;梁成罡
作者机构：
中国食品药品检定研究院,北京102629;吉林大学,长春130015
文献出处：
引用格式：
[1]李晶;邵正康;胡馨月;李懿;梁成罡-.新型定点修饰的聚乙二醇化重组人生长激素修饰位点研究)[J].药物分析杂志,2022(01):86-93
A类：
聚乙二醇化重组人生长激素,HOOC
B类：
定点修饰,修饰位点,PEG,rhGH,MALDI,TOF,质谱分析,质量数,色谱柱,UPLC,Pro,tein,ACQUITY,BEH,C4,Column,水溶液,乙腈,流动相,梯度洗脱,柱温,质谱数据,集条,MSE,eV,碎裂,平均相对分子质量,仅存,精氨酸,赖氨酸,连接子,CH2,N3,羧基端,共价,另一端,叠氮基团,偶联,联合运用,质谱技术,国家对照品,肽图,分子量,基质辅助,激光解吸,飞行时间质谱,四极
AB值：
0.288477
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