目的 研究ApoE-/-小鼠,采用针刺与中药相结合共同干预,观察其对ApoE-/-小鼠海马自噬功能的作用以及对β-淀粉样蛋白(Aβ)表达的影响,探寻针药并举、联合治疗能否提高ApoE-/-小鼠的认知能力及其可能的作用机制.方法 选用同龄ApoE-/-小鼠及C57BL/6L小鼠,均8周龄,各50只及10只,分别为喂养高脂饲料及常规饲料.C57BL/6L小鼠作为空白组.16周后全程进食高脂饲料的ApoE-/-小鼠分成模型组、低药组、高药组、针药组、针刺组5组,均为随机选取,每组10只.17周起,除外空白组的各组ApoE-/-小鼠各自给予相应干预8周,检测行为学,并对数据进行记录.结束后,研究小鼠海马区的变化,包括自噬体的形成情况,Aβ1-42及微管相关蛋白轻链3、p62蛋白的表达水平,分别进行透射电镜观察,免疫组化法及Western blot法检测.结果 在水迷宫测验中,模型组小鼠比照空白组需花更长时间找到平台,即逃避潜伏期延长(P＜0.05);其余各治疗组相比模型组,逃避潜伏期呈有不同程度缩短趋势,但只有针药组比较之下,差异有统计学意义(P＜0.05).透射电镜下,模型组海马区神经元扭曲畸形,甚至萎缩,细胞核膜不光滑,完整度下降,双层膜结构不清晰,自噬泡鲜见于胞质内;针药组仍有神经元局部变形、一定程度上出现萎缩,自噬泡在胞质内可见.免疫组织化学结果显示,模型组比照空白组,海马区更多的Aβ1-42阳性细胞表达数量(P＜0.05),伴随出现一定数量的老年斑;针药组比照模型组,小鼠海马区减少的Aβ1-42阳性细胞表达(P＜0.05).Western blot结果显示,模型组比照空白组,海马区中有明显增高的LC3-Ⅰ、p62蛋白表达(P＜0.05),显著降低的LC3-Ⅱ蛋白表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(P＜0.05);比照模型组,针药组LC3-Ⅰ、p62蛋白表达水平在海马区中下调明显(P＜0.05),相反,LC3-Ⅱ蛋白表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ显然升高(P＜0.05).结论 ApoE基因敲除小鼠认知功能可通过针刺联合中药的方法得到提高,且针药并举可使细胞自噬能力增强,提高Aβ1-42清除效率,最终缓解神经细胞毒性损伤可能是其作用机制.

ApoE基因敲除小鼠;针药联合;细胞自噬;β-淀粉样蛋白1-42;学习记忆能力

吕美娟;王玉;马贤德;任路

辽宁中医药大学,辽宁沈阳110032

辽宁中医杂志

[1]吕美娟;王玉;马贤德;任路-.针药并用对ApoE基因敲除小鼠自噬水平及学习记忆能力的影响)[J].辽宁中医杂志,2022(05):180-185,后插4

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