典型文献
构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统及打靶功能验证
文献摘要:
目的:构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统并在细胞水平上对其打靶功能进行验证.方法:参考数据库中人SLC39A4强致病位点,对比分析人和小鼠Slc39a4蛋白序列,将人强致病位点定位于小鼠基因组上.根据定位区域的小鼠基因组DNA序列,设计3个向导RNA(small guide RNA,sgRNA)序列,构建表达载体.通过细胞转染、药物筛选,获得阳性细胞.利用PCR扩增、T7 Endonu-clease酶切反应和TA克隆测序分析打靶情况以及打靶位点的基因型和编辑效率.结果:成功构建了3个sgRNA,sgRNA3导向序列可诱导Cas9蛋白打靶小鼠Slc39a4基因,打靶效率为30%.结论:成功构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统,为制备SLC39A4基因编辑动物模型,深入研究SLC39a4基因的致病机理奠定基础.
文献关键词:
基因编辑;CRISPR/Cas9;Slc39a4;肠病性肢端皮炎
中图分类号:
作者姓名:
江晓雨;杨志成;黄念;于鸿浩;唐雪辉;岳鹏鹏
作者机构:
桂林医学院智能医学与生物技术学院,广西桂林 541199;桂林医学院广西高校生物化学与分子生物学重点实验室,广西桂林 541199;桂林优利特医疗电子有限公司, 广西 桂林 541004
文献出处:
引用格式:
[1]江晓雨;杨志成;黄念;于鸿浩;唐雪辉;岳鹏鹏-.构建靶向小鼠Slc39a4基因的CRISPR/Cas9系统及打靶功能验证)[J].华夏医学,2022(06):51-56
A类:
Slc39a4,SLC39A4,Endonu,clease,sgRNA3,SLC39a4
B类:
CRISPR,Cas9,打靶,功能验证,参考数据库,病位,点定,向导,small,guide,建表,表达载体,过细,细胞转染,药物筛选,阳性细胞,T7,TA,克隆测序,测序分析,靶位,基因型,编辑效率,基因编辑,动物模型,致病机理,肠病性肢端皮炎
AB值:
0.287177
相似文献
机标中图分类号,由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成,仅供学习研究参考。