乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)在生成后即被快速降解,但目前影响HBx稳定性的机制仍未完全阐明.课题组前期通过酵母双杂交筛选与HBx具有相互作用的去泛素化酶(Deubiqutinases,DUBs),含MPN结构域蛋白(MPN domain containing protein,MPND)为筛选获得的蛋白之一.本研究首先采用免疫共沉淀和激光共聚焦实验验证HBx与MPND的相互作用,并通过酵母双杂交实验进一步分析两者相互作用的区域.Western blot检测过表达MPND的肝癌细胞中HBx蛋白水平的变化.以蛋白合成抑制剂环己酮亚胺(Cycloheximide,CHX)或蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,检测MPND对HBx蛋白半衰期及降解途径的影响.通过泛素化实验分析MPND对HBx泛素化水平的影响.采用双荧光素酶报告基因检测实验和克隆形成实验检测MPND对HBx生物学功能的影响.结果显示,MPND与HBx在肝癌细胞内存在相互作用,且HBx的26～50和81～120位氨基酸与MPND的272～362位氨基酸介导HBx与MPND的结合;过表达MPND的肝癌细胞中,HBx蛋白水平显著增高,HBx的半衰期明显延长,且蛋白酶体抑制剂处理后,MPND对HBx蛋白降解的抑制效果更为显著,但HBx泛素化水平没有变化;共表达MPND与HBx的肝癌细胞中,MPND通过上调HBx蛋白水平,进而促进了HBx对NF-κB启动子的反式激活作用,且进一步抑制克隆形成.本研究表明,MPND通过泛素非依赖-蛋白酶体途径抑制HBx降解,从而增加HBx蛋白水平,调控HBx功能,可能参与HBV致病机制,以此蛋白相互作用为靶标,将为HBV感染相关肝脏疾病的治疗提供有益思路.

乙型肝炎病毒X蛋白;去泛素化酶;蛋白酶体;蛋白降解

张翼;吴琼;施佳健;张璐;林旭;陈婉南

福建医科大学 消化道恶性肿瘤教育部重点实验室,福州350122;福建省肿瘤微生物学重点实验室,福州350122;福建医科大学基础医学院病原生物学系,福州350122

病毒学报

[1]张翼;吴琼;施佳健;张璐;林旭;陈婉南-.含MPN结构域蛋白(MPND)通过上调乙型肝炎病毒X蛋白水平影响其功能)[J].病毒学报,2022(06):1372-1381

MPND,Deubiqutinases

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