典型文献
鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A原核表达及间接ELISA方法的建立和初步应用
文献摘要：
为建立鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,以RA贵州分离株RAG06基因组为模板扩增并克隆鸭疫里默氏杆菌OmpA基因,构建pET32a-OmpA重组原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经诱导、超声、纯化后,通过SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定获得OmpA重组蛋白大小约57 KD;以OmpA重组蛋白为包被抗原初步建立ELISA方法并优化,经多次方阵检测结果显示,OmpA蛋白以2.243 mg/mL的浓度进行包被,血清以1∶ 100稀释,抗原包被条件为4℃过夜、封闭条件为37℃120 min、血清反应时间为37℃60 min、酶标抗体工作浓度为1∶ 1000、酶标抗体反应时间为37℃60 min、显色时间为15 min为最佳条件.确定临界值为0.389.特异性试验表明RA阳性血清有较好反应外,其他血清均无明显反应.批内变异系数2.77％～8.00％,批间变异系数为1.10％～7.80％.当阳性血清稀释比例为1:1600时,仍可判断为阳性,敏感性较高.应用该方法检测贵州省120份鸭血清、65份鹅血清证明该方法能用于水禽源鸭疫里默氏杆菌的检测,应用该方法检测灭活疫苗免疫后的鸭血清和卵黄抗体,结果表明符合灭活疫苗消长规律.试验建立的ELISA方法,为RA的流行病学调查和RA抗体监测提供了血清学诊断方法.
文献关键词：
鸭疫里默氏杆菌;外膜蛋白A;原核表达;ELISA
中图分类号：
作者姓名：
陈汝佳;李婷;余波;张亚楠;蒲龄;欧德渊;徐景峨
作者机构：
贵州大学动物科学学院,贵阳550025;贵州省农科院畜牧兽医研究所,贵阳550005
文献出处：
引用格式：
[1]陈汝佳;李婷;余波;张亚楠;蒲龄;欧德渊;徐景峨-.鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A原核表达及间接ELISA方法的建立和初步应用)[J].中国兽药杂志,2022(04):9-16
A类：
RAG06
B类：
鸭疫里默氏杆菌,外膜蛋白,原核表达,初步应用,Riemerella,anatipestifer,间接酶联免疫吸附试验,分离株,OmpA,pET32a,质粒,大肠杆菌,BL21,DE3,感受态,SDS,PAGE,blotting,分析鉴定,重组蛋白,KD,包被抗原,原初,次方,方阵,行包,过夜,封闭条件,抗体反应,显色,最佳条件,阳性血清,当阳,稀释比例,可判,鸭血,水禽,灭活疫苗,疫苗免疫,卵黄抗体,消长规律,流行病学调查,抗体监测,血清学诊断
AB值：
0.341646
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