背景与目的:肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球常见的肿瘤之一,目前已证实长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)参与HCC的发生、发展.近期有研究发现作为一种功能性的lncRNA,即长基因间非蛋白编码RNA 671(long intergenic non-protein coding RNA 671,LINC00671)可能是新的抑癌分子,但其在HCC中的作用及分子机制尚不清楚.本研究旨在探讨LINC00671在HCC中的作用及可能的分子机制.方法:通过GEPIA、starBase数据库分析LINC00671在HCC及正常肝组织中的表达及预后情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测LINC00671在不同HCC细胞系中的表达差异;再采用RNA荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验观察LINC00671亚细胞定位.体外敲低或过表达LINC00671后,利用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、流式细胞术、细胞划痕及transwell实验分别观察LINC00671对HCC细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响.随后通过生物信息学预测LINC00671作为细胞核内lncRNA的下游靶分子,starBase、GEPIA数据库分析LINC00671与靶分子c-myc的相关性并进行RTFQ-PCR及蛋白质印迹法(Western blot)验证.最后,通过甲基化DNA免疫共沉淀PCR(methylated DNA immunoprecipitation-PCR,MeDIP-PCR)观察LINC00671对靶基因启动子甲基化水平的影响.结果:数据库分析结果显示,LINC00671在HCC组织中明显下调且其高表达预示着较好的预后(P?<0.05);LINC00671在不同HCC细胞系中表达下调且存在表达差异;LINC00671主要分布于细胞核内.体外肿瘤细胞行为学实验发现,LINC00671可以明显抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力(P<0.05),同时其对细胞凋亡具有显著促进作用(P<0.05).生物信息学分析结果显示,LINC00671在核内与癌基因c-myc启动子区可能存在Hoogsteen配对,数据库结果比对显示,LINC00671与c-myc表达水平呈现显著负相关(P<0.05);LINC00671可以显著下调c-myc表达(P<0.05).MeDIP-PCR结果显示,LINC00671可以增加c-myc启动子甲基化水平(P<0.05).结论:LINC00671可能通过介导c-myc启动子甲基化下调后者表达从而抑制HCC进展.

肝细胞肝癌;LINC00671;c-myc

郭涛;宋宁;孙玉琪;田佳琪;唐婕;孙榕婍;蒋英英

潍坊医学院基础医学院病理生理学教研室,山东潍坊 261053;潍坊医学院口腔医学院,山东潍坊 261053;潍坊医学院临床医学院,山东潍坊 261053;潍坊医学院附属医院口腔科,山东潍坊 261035

中国癌症杂志

[1]郭涛;宋宁;孙玉琪;田佳琪;唐婕;孙榕婍;蒋英英-.长链非编码RNA LINC00671对肝细胞肝癌生物学行为的影响及机制)[J].中国癌症杂志,2022(10):990-999

LINC00671,RTFQ,MeDIP

长链非编码,肝细胞肝癌,生物学行为,hepatocellular,carcinoma,HCC,long,coding,lncRNA,蛋白编码,intergenic,protein,GEPIA,starBase,数据库分析,肝组织,预后情况,实时荧光定量聚合酶链反应,real,fluorescence,quantitative,polymerase,chain,reaction,细胞系,表达差异,荧光原位杂交,situ,hybridization,FISH,实验观察,亚细胞定位,敲低,过表达,试剂盒,counting,kit,CCK,流式细胞术,划痕,transwell,别观,迁移及侵袭,细胞核,myc,蛋白质印迹法,blot,免疫共沉淀,methylated,immunoprecipitation,对靶,靶基因,基因启动子甲基化,甲基化水平,预示,肿瘤细胞,细胞行为,行为学实验,细胞的增殖,侵袭能力,生物信息学分析,癌基因,启动子区,Hoogsteen,结果比对

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