典型文献
原代大鼠脂肪间充质干细胞的体外培养扩增及鉴定
文献摘要：
背景:脂肪间充质干细胞具有调控内分泌代谢、维持脂肪细胞周围微环境稳态、参与脂肪细胞发育等功能,在脂质代谢和肥胖症发生发展中起着重要作用.目前脂肪间充质干细胞的体外培养主要采用Ⅰ型胶原酶消化法,但其存在消化时间较长、效率低的缺点,故如何选择合适消化酶,以缩短消化时间、提高实验效率,值得关注和探索.目的:建立简单、高效的体外大鼠脂肪间充质干细胞原代培养方法,为临床开展干细胞治疗和基因治疗提供重要的细胞载体.方法:无菌条件下取出大鼠双侧腹股沟和附睾处的脂肪垫组织,用虹膜剪剪碎成糊状,加入2 mL 0.1％ Ⅱ型胶原酶消化45 min,洗涤离心后接种于含体积分数为10％胎牛血清的低糖型DMEM完全培养基中,置于CO2培养箱内进行原代培养.待细胞达80％-90％融合时,以1:3的比例进行传代培养.倒置显微镜下连续观察细胞形态变化,并对第4代目的细胞进行细胞表面标志物特异CD分子检测及成脂、成骨诱导分化实验.结果 与结论:①原代培养3 d后,少量短梭形细胞爬出;5 d后,细胞呈集落或团簇样生长,形态为长梭形;6-8 d时,细胞集落相互融合,密度达80％-90％,呈漩涡状排列;传至第3代时,细胞增殖迅速,接种48 h后即可再次传代,且细胞形态均一,呈现明显的鱼群样生长;②流式细胞仪检测结果显示CD90、CD73和CD29表达阳性,CD34、CD45和CD11b/c呈阴性表达;③第4代脂肪间充质干细胞成脂诱导7-10 d后,细胞形态逐渐由长梭形变为多边形或圆形,胞浆内积聚了大小不等的脂肪滴,经油红O染色后脂肪滴呈鲜艳深红色;而成骨诱导21 d后,细胞逐渐由长梭形变为多边形,呈聚集样生长,表面有大小不等的黑色小颗粒,局部有矿化样的结晶物;经茜素红染色后可见散在分布、大小不等的"蘑菇样"深红色球形结节;④由结果可见,该实验成功建立了一种简单、高效的大鼠脂肪间充质干细胞原代培养方法.
文献关键词：
干细胞;脂肪间充质干细胞;酶消化法;原代培养;鉴定;大鼠
中图分类号：
作者姓名：
刘海琴;马华根;唐元瑜
作者机构：
福建中医药大学中西医结合学院,福建省福州市 350122;北京中医药大学中医学院,北京市 102401;福建中医药大学中医学院,福建省福州市 350122
文献出处：
引用格式：
[1]刘海琴;马华根;唐元瑜-.原代大鼠脂肪间充质干细胞的体外培养扩增及鉴定)[J].中国组织工程研究,2022(19):2953-2957
A类：
B类：
脂肪间充质干细胞,体外培养,内分泌代谢,脂肪细胞,微环境,细胞发育,脂质代谢,肥胖症,胶原酶消化法,消化时间,消化酶,高实,实验效率,原代培养,培养方法,干细胞治疗,基因治疗,无菌,侧腹,腹股沟,附睾,虹膜,剪剪,碎成,糊状,洗涤,胎牛血清,低糖,DMEM,培养箱,箱内,传代培养,倒置,显微镜下,细胞形态,形态变化,细胞表面,表面标志物,分子检测,成脂,成骨诱导分化,化实验,梭形细胞,爬出,集落,团簇,相互融合,漩涡,代时,均一,鱼群,流式细胞仪,CD90,CD73,CD29,表达阳性,CD34,CD45,CD11b,多边形,内积,积聚,大小不等,鲜艳,深红色,小颗粒,矿化,结晶物,茜素红,蘑菇,色球
AB值：
0.359651
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