目的 观察炎症性肠病(IBD)小鼠模型中Let-7b的表达特征,分析Let-7b对树突状细胞(DCs)中血红素加氧酶1/TB和CNC同源性1(Bach1/HO-1)轴的调控机制,从而探讨其对肠黏膜上皮细胞(MCEC)伤口修复的机制.方法 建立IBD小鼠模型,分为正常组和模型组.培养DCs细胞和小鼠MCEC.将DCs细胞分为7组,其中包括Ⅰ:空白对照组;Ⅱ:Let-7b拟似物阴性对照组;Ⅲ:Let-7b拟似物转染组;Ⅳ:Let-7b抑制剂阴性对照组;Ⅴ:Let-7b抑制剂转染组;Ⅵ:Let-7b抑制剂联合Bach1抑制剂盐酸表小檗碱(EC)干预组;Ⅶ:Let-7b抑制剂、EC、HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)共处理干预组.采用qRT-PCR和Western blot法检测结肠组织和DCs中Let-7b的表达及DCs培养物上清液中Bach1和HO-1表达水平.并将各组DCs培养物上清液与结肠黏膜上皮细胞共培养,随后用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(Edu)试剂盒法检测结肠黏膜上皮细胞的细胞增殖率.伤口愈合实验检测细胞的损伤修复能力.荧光素酶基因报告实验分析Let-7b与Bach1的3′UTR区域的直接结合作用.结果 Let-7b在模型小鼠中表达降低(P<0.05),与Bach1表达呈负相关(P<0.05),而与HO-1呈正相关(P<0.05).DCs中成功过表达了Let-7b或抑制了Let-7b,发现细胞培养物上清液Bach1受到Let-7b的负调控(P<0.05),而细胞培养物上清液中HO-1受到正调控(P<0.05).机制研究显示了DCs中Bach1是Let-7b的靶基因,而HO-1是下游靶基因.另外,各组细胞培养物上清液与结肠黏膜上皮细胞共培养后,观察到Let-7b拟似物可以明显抑制Bach1向细胞外表达并促进细胞培养物上清液中HO-1的表达,从而促进结肠黏膜上皮细胞的增殖和伤口愈合(均P<0.05).结论 Let-7b靶向抑制DCs的Bach1并激活HO-1促进肠黏膜上皮细胞的增殖和修复.表明调控Let-7b/Bach1/HO-1轴可能是治疗IBD的潜在靶点.

小RNA Let-7b;TB和CNC同源性1;血红素加氧酶-1;炎症性肠病

田元元;覃晓日;田阁;符雪婷;孙晓宁

海南省人民医院(海南医学院附属海南医院)消化内科 海口570311;海南医学院第二附属医院 海口570216;北京市先农坛体育运动技术学校科研科 北京100050;海南医学院 海口571199

实用医学杂志

[1]田元元;覃晓日;田阁;符雪婷;孙晓宁-.Let-7b靶向抑制树突状细胞Bach1通过激活HO-1调控肠黏膜的损伤修复)[J].实用医学杂志,2022(23):2933-2941

Bach1,MCEC

Let,7b,靶向抑制,树突状细胞,HO,损伤修复,炎症性肠病,IBD,小鼠模型,表达特征,DCs,血红素加氧酶,TB,CNC,同源性,调控机制,肠黏膜上皮,上皮细胞,伤口修复,空白对照,转染,表小檗碱,锌原卟啉,ZnPP,共处理,qRT,blot,结肠组织,上清液,细胞共培养,乙炔基,脱氧尿苷,Edu,试剂盒法,细胞增殖率,伤口愈合,实验检测,修复能力,荧光素酶,酶基因,UTR,模型小鼠,功过,过表达,细胞培养,负调控,正调控,靶基因,胞外表达,细胞的增殖,潜在靶点

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