目的:研究甘草素(liquiritigenin,LQ)对长波紫外线(UVA)诱导的正常人表皮角质形成细胞(NHEK)氧化损伤的保护作用,并探讨其光老化的保护作用机制.方法:建立12 J·cm-2剂量的UVA诱导的NHEK细胞的光老化模型.WST-8(CCK-8)比色法测定细胞增殖活力;β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老水平;流式细胞仪检测活性氧(ROS)含量;荧光显微镜观察线粒体膜电位的变化;试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSH)、丙二醛(MDA)的活性.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关蛋白表达水平;免疫荧光法(immunofluorescence)探究核因子E2相关因子2(Nrf2)和Keap-1在细胞核内表达及相互作用.结果:与UVA组相比,20,50,100μmol·L-1甘草素呈浓度依赖性地抑制UVA诱导的细胞衰老、ROS和MDA的生成、线粒体膜电位的下降以及基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-3,MMP-9)的合成;显著提高细胞增殖活力、抗氧化酶活性(SOD,GSH)和Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)的生成(P<0.05).在蛋白表达水平上,与UVA组相比,甘草素能够促进Nrf2和SOD-2的表达水平升高,抑制Keap-1的表达水平降低(P<0.05).共定位分析表明,12 J·cm-2剂量的UVA辐照导致NHEK细胞Keap-1与Nrf2结合减弱,核内Nrf2表达降低,抑制其转录活性;100μmol·L-1甘草素能够维持Keap-1与Nrf2结合,促进Nrf2在核内表达,激活其转录活性.结论:甘草素能够通过Keap-1/Nrf2信号通路,促进Nrf2核转录,增强抗氧化能力保护UVA诱导的NHEK细胞氧化损伤,为明确其作为皮肤光老化保护剂提供了理论依据.

甘草素;正常人表皮形成细胞;长波紫外线;氧化损伤;核因子E2相关因子2

卢琦;邹林峰;高远真;叶婷;李梦娇;张钰坤;梁冰;原阳;孙文社;邢东明

青岛大学基础医学院,青岛266071;青岛大学附属医院肿瘤研究所和青岛肿瘤研究院,青岛266071;清华大学生命科学学院,北京100091

中国新药杂志

[1]卢琦;邹林峰;高远真;叶婷;李梦娇;张钰坤;梁冰;原阳;孙文社;邢东明-.甘草素对长波紫外线诱导的皮肤光老化的保护作用及机制)[J].中国新药杂志,2022(20):2056-2066

NHEK,正常人表皮形成细胞

甘草素,长波紫外线,皮肤光老化,liquiritigenin,LQ,UVA,角质形成细胞,保护作用机制,光老化模型,WST,CCK,比色法,细胞增殖活力,半乳糖,糖苷酶,染色法,细胞衰老,流式细胞仪,ROS,荧光显微镜观察,线粒体膜电位,试剂盒,中超,谷胱甘肽还原酶,GSH,蛋白免疫印迹法,blot,蛋白表达水平,免疫荧光法,immunofluorescence,核因子,E2,相关因子,Nrf2,Keap,细胞核,浓度依赖性,基质金属蛋白酶,MMP,抗氧化酶活性,胶原蛋白,COL1A1,平降,共定位,定位分析,辐照,转录活性,抗氧化能力,细胞氧化损伤,保护剂

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