目的 探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在脓毒症后急性肝损伤中的保护作用及潜在机制.方法 8～10周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为盲肠结扎穿刺术(CLP)组(脓毒症后急性肝损伤模型小鼠)、CLP+EGCG低剂量(4 mg/kg,皮下注射)组、CLP+EGCG高剂量(8 mg/kg,皮下注射)组和假手术组(n=6).人正常肝细胞(L02细胞)根据干预方式不同分为脂多糖(400 ng/mL,脓毒症后急性肝损伤细胞模型)组、脂多糖(400 ng/mL)+高迁移率族蛋白B1(HMGB1)(100 ng/mL)组、脂多糖(400 ng/mL)+EGCG(100μg/mL)组和对照组(加入PBS)组.术后24 h收集小鼠全血并分离肝组织,采用全自动生化分析仪检测小鼠血常规及肝功能,通过H-E染色观察肝组织病理学变化.采用ELISA检测小鼠血清及L02细胞培养上清液中炎症因子(HMGB1、TNF-α、IL-6)表达,采用蛋白质印迹法检测小鼠肝组织及L02细胞中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、焦亡相关蛋白[消皮素D(GSDMD)、caspase 1、caspase 11、IL-1β、IL-18]的表达,采用免疫组织化学染色分析小鼠肝组织中HMGB1、GSDMD的表达及定位情况.结果 CLP组小鼠白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数均低于假手术组(P均<0.05),血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)均高于假手术组(P均<0.01),提示脓毒症后急性肝损伤模型小鼠构建成功.与CLP组相比,CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠ALT、AST、HMGB1、TNF-α、IL-6表达水平均降低(P均<0.05),且这些指标在CLP+EGCG高剂量组较CLP+EGCG低剂量组降低更显著(P均<0.05).组织病理学提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠肝组织损伤较CLP组减轻,且以高剂量组较为显著.CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠肝组织中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、NLRP3和焦亡相关蛋白的表达水平均低于CLP组(P均<0.05),且以高剂量组降低更为明显(P均<0.05).免疫组织化学染色显示GSDMD主要表达于肝细胞的细胞质内,而HMGB1在细胞质和细胞核均有表达;CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠肝组织中HMGB1和GSDMD的表达均较CLP组减少(P均<0.05),且CLP+EGCG高剂量组降低更为明显(P均<0.05).脂多糖组、脂多糖+EGCG组及对照组细胞培养上清液中HMGB1、TNF-α和IL-6的表达水平均低于脂多糖+HMGB1组(P均<0.05),且该3个指标在脂多糖+EGCG组降低较脂多糖组更为显著(P均<0.05).脂多糖+HMGB1组中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、NLRP3和焦亡相关蛋白的表达水平均高于脂多糖组、脂多糖+EGCG组和对照组(P均<0.05),且脂多糖+EGCG组上述蛋白质的表达水平低于脂多糖组(P均<0.05).结论 EGCG对脓毒症后急性肝损伤有保护作用,其机制可能与通过减弱HMGB1/TLR4/NF-κB/NLRP3途径降低肝细胞焦亡有关.

表没食子儿茶素没食子酸酯;脓毒症;急性肝损伤;高迁移率族蛋白B1;细胞焦亡

李飞;吴传新;何佳辉;张杰;刘慧玲;孙航

重庆医科大学附属第二医院病毒性肝炎研究所,重庆 400010;重庆医科大学附属第二医院肝胆外科,重庆 400010;成都市双流区妇幼保健院新生儿科,成都 610200

海军军医大学学报

[1]李飞;吴传新;何佳辉;张杰;刘慧玲;孙航-.表没食子儿茶素没食子酸酯通过减弱HMGB1/TLR4/NF-κB/NLRP3途径改善脓毒症后急性肝损伤)[J].海军军医大学学报,2022(09):1012-1021

CLP+EGCG,+EGCG

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