典型文献
双峰驼NUCB2/Nesfatin-1抗体的制备及其表达分布
文献摘要：
双峰驼(Camelus bactrianus)经过长期的自然选择,具备了许多特殊的生物学特性,比如极强的耐渴、耐饥饿以及适应恶劣气候等能力.Nesfatin-1是一种由82个氨基酸组成的肽,通过其前体物质NUCB2在Lys83～Arg84位点的前激素转化酶(PCs)的蛋白质水解而来,其可以调节机体的能量代谢效率,对食欲有抑制作用.研究双峰驼体内NUCB2/Nesfatin-1的分布与表达,以探究双峰驼体内是否具有特有的能量代谢方式,是否与其不会发生代谢性疾病有一定的联系.使用化学合成的方法合成双峰驼NUCB2/Nesfatin-1蛋白特定表位的半抗原多肽,使用马来酰亚胺法将半抗原与血蓝蛋白(KLH)偶联,通过免疫动物制备针对NUCB2/Nesfatin-1蛋白单一抗原表位的多克隆抗体,应用Western Blot方法检测NUCB2/Nesfatin-1蛋白在双峰驼下丘脑(弓状核、孤束核、腹内侧核)、前峰脂肪、后峰脂肪、胃(胃底腺周围组织)、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、胰腺、肝以及腹部脂肪组织中的表达情况,使用荧光定量PCR技术检测NUCB2/Nesfatin-1 mRNA在双峰驼上述组织中的表达情况.结果采用GraphPad Prism 5.0软件的t检验分析.合成的双峰驼NUCB2/Nesfatin-1蛋白特定表位的多肽杂峰很少,经过计算其纯度大于95％.多肽的质荷比[M+4H]4+和[M+3H]3+符合预期.经过间接ELISA法测定制备的针对NUCB2/Nesfatin-1蛋白的多克隆抗体的效价为5.12×105,成功制备多克隆抗体.使用制备的NUCB2/Nesfatin-1多克隆抗体检测双峰驼体内的NUCB2/Nesfatin-1蛋白的分布,其中,在双峰驼脂肪组织和胰腺组织中表达较为显著.荧光定量PCR检测双峰驼体内的NUCB2/Nesfatin-1 mRNA的分布,在所检测的组织中均有基因表达,其中,在腹部脂肪和肝组织的相对表达量较高.本研究通过分析抗原表位及合成多肽的方式,成功制备了针对双峰驼NUCB2/Nesfatin-1蛋白的特异性抗体,且该抗体的效价高、特异性强.通过成功制备的特异性抗体在蛋白层次上检测NUCB2/Nesfatin-1在双峰驼体内的分布情况,再使用荧光定量PCR方法在基因层次检测NUCB2/Nesfatin-1在双峰驼体内的分布情况.通过对结果的分析后发现,NUCB2/Nesfatin-1可能在双峰驼的耐渴、耐饥饿的机制调节中起到了抑制食欲的作用,使得双峰驼可以忍受长时间的饥饿,在双峰驼的外周脂肪组织中高表达,推测NUCB2/Nesfatin-1蛋白在双峰驼体内可能通过抑制脂肪细胞的分化,促进脂肪细胞中脂滴的水解为机体提供能量,其具体在脂肪细胞中的功能有待我们的进一步研究.
文献关键词：
Nesfatin-1;多克隆抗体;双峰驼;组织分布
中图分类号：
作者姓名：
白兆星;么宏强;罗雨晨;张雅文;张光杰;斯日古楞
作者机构：
内蒙古农业大学兽医学院,农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室 呼和浩特 010000
文献出处：
引用格式：
[1]白兆星;么宏强;罗雨晨;张雅文;张光杰;斯日古楞-.双峰驼NUCB2/Nesfatin-1抗体的制备及其表达分布)[J].动物学杂志,2022(03):401-411
A类：
bactrianus,耐渴,Lys83,Arg84,M+4H,M+3H
B类：
双峰驼,NUCB2,Nesfatin,表达分布,Camelus,自然选择,多特,生物学特性,耐饥,饥饿,氨基酸组成,前体物质,转化酶,PCs,蛋白质水解,能量代谢,食欲,代谢方,代谢性疾病,化学合成,成双,半抗原,马来酰亚胺,血蓝蛋白,KLH,偶联,抗原表位,多克隆抗体,Blot,下丘脑,弓状核,孤束核,腹内,后峰,胃底腺,周围组织,十二指肠,空肠,回肠,盲肠,腹部脂肪,脂肪组织,GraphPad,Prism,检验分析,质荷比,4+,3+,效价,抗体检测,胰腺组织,组织中表达,肝组织,相对表达量,合成多肽,特异性抗体,价高,白层,忍受,脂肪细胞,细胞的分化,脂滴,供能,组织分布
AB值：
0.223626
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