目的 建立狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上的适应株,为狂犬病疫苗研究提供生产用毒株.方法 将狂犬病病毒固定株PV2061接种于MRC-5细胞并进行连续性传代,通过对感染剂量(1∶100、1∶200、1∶300、1∶400、1∶500)、收获天数(4、7、10、13、16 d)及感染方式(混种感染、吸附感染、带毒传代)的优化,确定在MRC-5细胞上的培养条件,并分析不同层析介质(Sepharose 4FF、Sepharose 6FF)对狂犬病病毒分离纯化效果的影响.结果 狂犬病病毒固定株PV2061能较好地适应MRC-5细胞,通过连续性传代,在第4代病毒滴度可达6.0 lgLD50/mL以上,11～19代病毒滴度稳定在6.5 lgLD50/mL.感染剂量在1∶100～1∶500范围内,病毒滴度均能达6.0 lgLD50/mL以上;病毒峰值主要集中在8～13 d;混种感染和带毒传代优于吸附感染,病毒滴度均在5.5 lgLD50/mL以上.与Sepharose 6FF相比,Sepharose 4FF能有效去除总蛋白质,两种介质对抗原回收率均在85％～120％范围内,牛血清白蛋白残留量均低于50 ng/mL.结论 建立了 MRC-5细胞传代适应的狂犬病病毒适应株MPV2061,为后续人用狂犬病疫苗生产工艺的研究提供了数据支持.

狂犬病病毒;固定株;二倍体细胞;连续传代;病毒滴度;感染方式;层析纯化

廖辉;吴琼;焦龙;甄祖刚;杨文腰;周荔葆

辽宁成大生物股份有限公司,辽宁沈阳110179

中国生物制品学杂志

[1]廖辉;吴琼;焦龙;甄祖刚;杨文腰;周荔葆-.狂犬病病毒固定株PV2061在人二倍体细胞MRC-5上适应株的建立)[J].中国生物制品学杂志,2022(07):785-789

PV2061,6FF,lgLD50,MPV2061

狂犬病病毒,固定株,人二倍体细胞,MRC,疫苗研究,用毒,毒株,感染剂量,感染方式,混种,带毒,培养条件,层析介质,Sepharose,4FF,病毒分离,分离纯化,病毒滴度,总蛋白质,抗原回收率,牛血清白蛋白,蛋白残留,残留量,人用狂犬病疫苗,疫苗生产,连续传代,层析纯化

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