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胰高血糖素样肽-1受体激动剂融合蛋白纯度反相高效液相色谱检测方法的建立及验证
文献摘要：
目的 建立用于检测胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)受体激动剂融合蛋白纯度的反相高效液相色谱(reverse phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证.方法 采用 Agilent ZORBAX 300Extend-C18(4.6 mm×150 mm)分析柱和 ZORBAX 300Extend-C18(4.6 mm×12.5 mm)保护柱.色谱条件:流动相A液:0.1％三氟乙酸水溶液;流动相B液:0.1％三氟乙酸的乙腈溶液;上样体积:100 μL;工作流速:0.50 mL/min;A 相溶液平衡系统至基线平稳,开始进样;0～5 min:0～50％B;5～15 min:50％～60％B;15～20 min:60％～100％B;20～30 min:100％B;8 min:100％A;检测波长:280 nm;柱温箱温度:40℃.验证方法的系统适用性、专属性、灵敏度、重复性、中间精密性和耐用性.采用建立的方法检测6批GLP-1受体激动剂融合蛋白的纯度.结果理论塔板数为26 891,对称因子为0.64;空白对照(稀释液)、阴性对照[抗凝血酶-Ⅲ(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)及睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)]对色谱图无干扰峰,GLP-1受体激动剂融合蛋白与阴性对照分离度＞1.5;方法 的灵敏度为4.8 μg/mL;重复性验证峰面积百分比的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.35％,保留时间RSD为0.07％;中间精密性验证峰面积百分比RSD为0.75％,保留时间RSD为0.07％;不同系统温度下测定峰面积百分比RSD为3.94％,保留时间RSD为0.10％o 6批GLP-1受体激动剂融合蛋白的纯度均≥95.0％.结论 建立的用于检测GLP-1受体激动剂融合蛋白纯度的RP-HPLC法具有良好的系统适用性、灵敏度、精密性和耐用性,可用于GLP-1受体激动剂融合蛋白的质量控制.
文献关键词：
胰高血糖素样肽-1受体激动剂;融合蛋白;反相高效液相色谱;纯度
中图分类号：
作者姓名：
高雪峰;王婉如;郑伟峰;杨军;张艳丽;马亚茹;陈勇
作者机构：
兰州生物制品研究所有限责任公司第四研究室甘肃省疫苗工程技术研究中心,甘肃兰州730046
文献出处：
引用格式：
[1]高雪峰;王婉如;郑伟峰;杨军;张艳丽;马亚茹;陈勇-.胰高血糖素样肽-1受体激动剂融合蛋白纯度反相高效液相色谱检测方法的建立及验证)[J].中国生物制品学杂志,2022(04):454-457,463
A类：
300Extend
B类：
胰高血糖素,受体激动剂,融合蛋白,蛋白纯度,反相高效液相色谱,液相色谱检测,色谱检测方法,glucagon,like,peptide,GLP,reverse,phase,high,performance,liquid,chromatography,RP,HPLC,Agilent,ZORBAX,C18,色谱条件,流动相,三氟乙酸,水溶液,乙腈,平衡系统,柱温,验证方法,系统适用性,专属性,精密性,耐用性,理论塔板数,空白对照,稀释液,抗凝血酶,antithrombin,AT,睫状神经营养因子,ciliary,neurotrophic,CNTF,色谱图,无干扰,分离度,峰面积,相对标准偏差,relative,standard,deviation,RSD,保留时间,同系,系统温度
AB值：
0.301649
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