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高效阴离子交换色谱-脉冲安培法检测冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的游离多糖含量
文献摘要：
目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培(HPAEC-PAD)法检测冻干b型流感嗜血杆菌(Hib)结合疫苗中游离多糖含量的方法,并对其进行验证,为Hib结合疫苗的质量监控提供依据.方法 优化水解供试品的实验条件,利用HPAEC-PAD法检测供试品中多聚磷酸核糖基核糖醇(PRP)含量.色谱条件采用CarboPac PA10分析柱(2 mm×250 mm)与CarboPac PA10保护柱(2 mm×50 mm),氢氧化钠-醋酸钠溶液梯度洗脱,流速为0.25 ml/min,脉冲安培检测器,进样体积为20μl.用乙醇分步沉淀法、C4固相萃取法和超速离心法分离Hib游离多糖,并对三种方法得到的结果进行比较.同时验证方法的系统适用性、特异性、线性、精密度及准确性.结果 确定水解条件为终浓度0.4 mol/L的NaOH,于37℃振荡1.5 h.本公司生产的冻干Hib结合疫苗不可用C4固相萃取柱分离游离多糖,确定了超速离心联合HPAEC-PAD法为冻干Hib结合疫苗游离多糖检测的最适方法.该方法专属性、分离度良好;PRP浓度在0.1962～19.616μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系,R2>0.99.3批供试品分别测定6次,RSD分别为4.1％、2.3％、3.3％,不同时间测得的中间精密度RSD分别为8.3％、3.6％ 和9.1％.游离多糖的加标回收率分别为102.9％、94.3％、92.0％,RSD分别为3.9％、8.7％、5.3％.结论 初步建立了冻干Hib结合疫苗游离多糖含量测定的超速离心联合HPAEC-PAD法.该方法具有良好的准确性、精密度及稳定性,可用于冻干Hib结合疫苗中游离多糖含量的检测.
文献关键词：
高效阴离子交换色谱-脉冲安培法;b型流感嗜血杆菌结合疫苗;超速离心;C4固相萃取;游离多糖
中图分类号：
作者姓名：
贾松华;邓海清;杜闪;张艳红;尹珊珊;刘建凯
作者机构：
102600 北京民海生物科技有限公司研发中心
文献出处：
引用格式：
[1]贾松华;邓海清;杜闪;张艳红;尹珊珊;刘建凯-.高效阴离子交换色谱-脉冲安培法检测冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的游离多糖含量)[J].中国医药生物技术,2022(06):518-526
A类：
B类：
阴离子交换色谱,冻干,流感嗜血杆菌,结合疫苗,游离多糖,多糖含量,HPAEC,PAD,Hib,质量监控,实验条件,多聚磷酸,核糖,糖基,糖醇,PRP,色谱条件,CarboPac,PA10,氢氧化钠,醋酸钠,钠溶液,梯度洗脱,ml,脉冲安培检测器,分步沉淀,沉淀法,C4,固相萃取法,超速离心法,三种方法,验证方法,系统适用性,精密度,水解条件,NaOH,固相萃取柱,多糖检测,专属性,分离度,峰面积,RSD,间测,加标回收率,含量测定
AB值：
0.228934
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