典型文献
绿色木霉内切葡聚糖酶基因EgⅦ的克隆及其表达
文献摘要：
[目的]在枯草芽孢杆菌中表达绿色木霉(Trichodoma vivide,T.viride)内切葡聚糖酶基因EgⅦ.研究内切葡聚糖酶基因EgⅦ的生物信息、基因克隆与表达及重组酶学性质.[方法]提取纤维素酶生产菌株绿色木霉AS3.3711的总RNA,通过反转录合成cDNA,并以之为模板利用PCR技术扩增获得内切葡聚糖酶基因EgⅦ,并进行生物信息学分析;构建了重组表达载体pMA5-EgⅦ,并利用热激转化法将其转入枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis,B.subtilis)WB600感受态细胞中,成功进行表达.[结果]生物信息学分析表明,内切葡聚糖酶基因EgⅦ编码249个氨基酸,蛋白质的分子量为26.8002 KD,理论等电点7.62,属于胞外蛋白;预测蛋白质三级结构与二级结构一致,由ɑ-螺旋、延伸链区、β-转角和无规则卷曲构成.电泳结果表示,重组枯草芽孢杆菌在EgⅦ基因片段大小符合处出现条带,表明成功将EgⅦ-pMA5转化到B.subtilis WB600中.刚果红染色结果显示重组枯草芽孢杆菌在CMC培养基上出现较大直径的透明圈,重组菌株上清粗酶液DNS酶活力达到22.71 U/mL,表明绿色木霉内切葡聚糖酶基因EgⅦ可以在枯草芽孢杆菌中表达,并具有较高活性.重组酶酶学性质分析表明,该酶的最适温度是60℃,最适pH值为6.4,且温度在50℃以下,pH值在5.6～8.0范围内,酶活力具有良好的稳定性.[结论]通过对内切葡聚糖酶基因EgⅦ克隆及分析,获得了表达内切葡聚糖酶基因EgⅦ的枯草芽孢杆菌基因工程菌,了解了重组酶酶学性质,为纤维素酶的广泛应用提供了理论基础.
文献关键词：
绿色木霉;内切葡聚糖酶;克隆;枯草芽孢杆菌;酶学性质
中图分类号：
[2]
农业科学（S）
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林业（S7）
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林业基础科学（S71）
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森林生物学（S718）
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森林生态学（S718.5）
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森林与生物环境（S718.52）
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生物因素（S718.52+1）
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微生物（S718.52+1.3）
作者姓名：
闫建英;张智;冯丽荣;汤华京;杨可心;魏罡;张晓彤
作者机构：
东北林业大学 林学院,黑龙江 哈尔滨 150040;黑龙江国宏节能环保有限公司,黑龙江 哈尔滨 150040
文献出处：
引用格式：
[1]闫建英;张智;冯丽荣;汤华京;杨可心;魏罡;张晓彤-.绿色木霉内切葡聚糖酶基因EgⅦ的克隆及其表达)[J].中南林业科技大学学报,2022(07):169-177
A类：
Trichodoma,vivide
B类：
绿色木霉,内切葡聚糖酶,酶基因,Eg,枯草芽孢杆菌,viride,基因克隆与表达,重组酶,纤维素酶,AS3,cDNA,生物信息学分析,重组表达,表达载体,pMA5,热激,转化法,转入,Bacillus,subtilis,WB600,感受态,分子量,KD,等电点,三级结构,二级结构,无规则,卷曲,电泳,条带,刚果红染色,染色结果,CMC,大直径,重组菌株,上清,粗酶液,DNS,酶活力,力达,高活性,酶学性质分析,达内,基因工程菌
AB值：
0.214309
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