目的 探讨全反式维A酸(ATRA)对骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导肝祖细胞(HPCs)成熟分化的作用.方法 BMP9、BMP9+1 μmol/L ATRA 及 BMP9+10 μmol/L ATRA 分别作用于肝祖细胞 14-19(HP14-19),荧光素酶报告基因检测清蛋白启动的荧光素酶(ALB-Glus)表达情况,Real-time PCR检测肝脏相关基因ALB、细胞角蛋白18(CK18)、酪氨酸转氨酶(TAT)、载脂蛋白B(ApoB)的mRNA表达水平,免疫荧光检测Alb、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A(UGT1A)的表达、高磺酸-希夫(PAS)染色和吲哚菁绿(ICG)摄取实验检测肝细胞的代谢及糖原合成功能,Real-time PCR及Western blotting检测维A酸(RA)信号通路相关分子维A酸受体(RAR)α、RARβ、RARγ及 BMP9 信号相关分子 Samd1、Samd5、Samd8 的表达.Ad-siRARα、Ad-siRARβ、Ad-siRARγ 感染细胞,BMP9+10μmol/L ATRA处理,观察细胞形态及PAS染色结果,检测ALB、CK18、TAT、ApoB的mRNA水平表达.结果 BMP9可显著诱导HP14-19的成熟分化,细胞形态呈现多角形铺路石样,Alb、CK18、ApoB及UGT1A表达显著上调,部分细胞具有代谢解毒及糖原合成功能.BMP9+1 μmol/L ATRA处理后,细胞形态更加成熟,体积增大,ALB、CK18、ApoB及UGT1A表达较BMP9组显著上调(P＜0.05),ICG和PAS染色阳性细胞数增多,与之相比,BMP9+10μmol/L ATRA的细胞呈现长梭形、纺锤形及多角形等多种形态,肝细胞相关标志表达降低,ICG和PAS染色阳性细胞数减少.1 μmol/L ATRA 显著增高 RARα、RARβ、RARγ 的表达,10 μmol/L ATRA 组较 1 μmol/L ATRA 组仅 RARα 表达增高,BMP9不影响Samd1、Samd5、Samd8的表达水平,但上调其磷酸化.Ad-siRARα可改善10 μmol/L ATRA诱导的细胞形态及PAS染色,Alb、CK18的表达显著上调(P＜0.05).结论 1 μmol/L ATRA可促进BMP9诱导的肝祖细胞成熟分化,10 μmol/L ATRA会导致细胞分化减弱,过量ATRA可能过度激活RARα信号,影响肝祖细胞分化.

全反式维A酸;骨形态发生蛋白9;肝祖细胞;高碘酸-希夫染色;吲哚菁绿摄取;小鼠

何昀;王银光

重庆医科大学附属儿童医院胃肠新生儿外科,国家儿童健康与疾病临床医学研究中心,儿童发育疾病研究教育部重点实验室,儿科学重庆市重点实验室,重庆 400014;重庆市中医院肛肠科,重庆 400021

解剖学报

[1]何昀;王银光-.全反式维A酸对骨形态发生蛋白9诱导小鼠肝祖细胞成熟分化的作用及机制)[J].解剖学报,2022(05):585-593

BMP9+1,BMP9+10,HP14,Glus,Samd1,Samd5,Samd8,siRAR,吲哚菁绿摄取

反式,骨形态发生蛋白,肝祖细胞,细胞成熟,成熟分化,ATRA,HPCs,荧光素酶报告基因,基因检测,清蛋白,ALB,Real,细胞角蛋白,CK18,酪氨酸,转氨酶,TAT,载脂蛋白,ApoB,免疫荧光检测,Alb,尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶,UGT1A,PAS,ICG,实验检测,肝细胞,糖原合成,blotting,Ad,细胞形态,染色结果,多角形,铺路石,解毒,加成,阳性细胞,纺锤形,磷酸化,细胞分化,高碘酸

0.155351