目的 观察氯喹对骨髓单核细胞(BMMs)向破骨细胞分化的抑制作用,并基于T细胞免疫调节因子1(TCIRG1)基因调控探讨相关机制.方法 获取小鼠BMMs,分为对照组、氯喹1组、氯喹2组,分别加入0、5、10μmol/L的氯喹,用核因子κB受体激活因子配体和巨噬细胞集落刺激因子刺激BMMs分化;采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞分化情况,RT-PCR法检测破骨细胞分化相关基因TCIRG1、T细胞活化核因子1(NFATc1)、Dc-stamp、MMP9、Oscar、IP3受体(IP3R)1、IP3R2、IP3R3 mRNA,Western blotting法检测TCIRG1、NFATc1、IP3R蛋白,免疫组化法观察NFATc1的亚细胞定位,流式细胞术检测溶酶体酸化情况,RT-PCR法检测空泡型质子泵相关亚基ATP6 V0d2、ATP6 V1c1 mRNA.将BMMs分为A、B、C、D组,A组转染过表达TCIRG1的腺病毒并以10μmol/L氯喹刺激,B组转染空病毒并以10μmol/L氯喹刺激,C组仅给予10μmol/L氯喹,D组不转染也不添加氯喹;采用Western blotting法检测细胞中的TCIRG1、NFATc1、IP3R2蛋白,RT-PCR法检测TCIRG1、NFATc1、IP3R1、IP3R2、IP3R3 mRNA.结果 氯喹2组TRAP阳性细胞体积小于氯喹1组;氯喹1组和氯喹2组细胞中NFATc1、Oscar、IP3R1、IP3R2、IP3R3 mRNA相对表达量低于对照组,氯喹2组Dc-stamp、MMP9 mRNA表达低于对照组(P均<0.05);对照组、氯喹1组、氯喹2组细胞中TCIRG1、NFATc1、IP3R2蛋白表达依次降低(P均<0.05),氯喹2组细胞核中NFATc1表达减少;氯喹1组、氯喹2组相较对照组溶酶体酸度降低;对照组、氯喹1组、氯喹2组TCIRG1、ATP6 V0d2、ATP6 V1c1 mRNA相对表达量依次降低(P均<0.05).与B、C组相比,A组出现了一些体积较大的TRAP阳性细胞,但是数量和体积未超过D组;A组NFATc1、IP3R2 mRNA及蛋白表达高于B、C组,但低于D组(P均<0.05).结论 氯喹对BMMs向破骨细胞分化有抑制作用,TCIRG1过表达可部分逆转氯喹对分化的抑制作用;氯喹的作用机制可能与调控TCIRG1、IP3R、NFATc1表达有关.

破骨细胞;骨髓单核细胞;细胞分化;氯喹;T细胞活化核因子1;T细胞免疫调节因子1;IP3受体2

林立营;张文;史要鹏;姜梅荣;张冬燕

聊城市人民医院口腔科聊城市人民医院精准生物医学重点实验室,山东聊城252000;聊城市东昌府区中医院口腔科

山东医药

[1]林立营;张文;史要鹏;姜梅荣;张冬燕-.氯喹对骨髓单核细胞向破骨细胞分化的抑制作用及其机制)[J].山东医药,2022(20):35-40

IP3R3,空泡型,V0d2,V1c1

氯喹,骨髓单核细胞,破骨细胞分化,BMMs,细胞免疫,免疫调节因子,TCIRG1,基因调控,相关机制,别加,核因子,巨噬细胞集落刺激因子,抗酒石酸酸性磷酸酶,TRAP,细胞活化,NFATc1,Dc,stamp,MMP9,Oscar,IP3R2,blotting,免疫组化法,亚细胞定位,流式细胞术,溶酶体,质子泵,亚基,ATP6,转染,过表达,腺病毒,加氯,IP3R1,阳性细胞,细胞体,体积小,相对表达量,细胞核,酸度

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