目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源的外泌体(exosomes)对肝库普弗(Kupffer)细胞极化的影响.方法 体外分离培养BMSCs后,经流式细胞术鉴定其表面分子表达,通过成骨和成脂诱导培养基诱导鉴定其分化潜能,通过外泌体提取试剂盒从BMSCs培养上清提取外泌体,电子显微镜观察其形态,并用流式细胞术鉴定表面分子表达.体外培养Kupffer细胞随机分为正常培养组、脂多糖(LPS)刺激组、LPS共培养组,光学显微镜下观察体外培养3组Kupffer细胞形态的变化.60只小鼠腹腔注射CC14复制急性肝损伤模型,并随机分为PBS对照组和外泌体治疗组,HE染色观察体内两组肝组织病理学变化、眼球取血检测肝功能谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的表达.Western blotting分别检测体外培养的3组Kupffer细胞和体内两组肝脏组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶1(ARG1)的表达,Real-time PCR法检测其iNOS、ARG1、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和C-X-C基序趋化因子(CXCL)-10的表达.结果 成功分离出BMSCs,具有成骨细胞和成脂细胞分化能力,并表达CD105、CD45;电子显微镜观察到分离的外泌体呈囊泡状,并表达CD63和CD81;光学显微镜观察显示,BMSCs的外泌体能减弱Kupffer细胞活化,BMSCs的外泌体注射后能减弱肝脏组织的病理性改变(P＜0.05),降低肝功能ALT和AST的表达(P＜0.05);Western blotting显示,体外实验LPS和外泌体共培养组与体内实验外泌体治疗组的ARG1的表达均增加(P＜0.05),iNOS均降低(P＜0.05);Real-time PCR显示,体外LPS和外泌体共培养组与体内外泌体治疗组的iNOS、IL-1β、TNF-α和CXCL-10的表达下降(P＜0.05),ARG1的表达增加(P＜0.05).结论 BMSCs来源的外泌体抑制肝Kupffer细胞向M1型极化.

骨髓间充质干细胞;外泌体;库普弗细胞;极化;免疫印迹法;小鼠

秦阳阳;许龙飞;王琪;韩晶;洪艳

贵州医科大学组织学与胚胎学教研室,贵阳 550004

解剖学报

[1]秦阳阳;许龙飞;王琪;韩晶;洪艳-.骨髓间充质干细胞来源的外泌体对小鼠肝库普弗细胞极化的影响)[J].解剖学报,2022(04):447-452

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