目的:研究角膜上皮细胞是否存在腺嘌呤核糖核苷酸活化的蛋白激酶(AMPK)磷酸化及真菌对角膜上皮细胞AMPK磷酸化和白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法:取人永生化角膜上皮细胞系，采用实时无标记细胞多功能分析仪筛选AMPK激动剂5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)(100、300、500和1 000 μmol/L)和抑制剂化合物C(10.0、12.5、15.0、17.5和20.0 μmol/L)对角膜上皮细胞作用的安全浓度范围。以单纯角膜上皮细胞作为正常对照组，角膜上皮细胞与孢子共培养作为孢子对照组，在孢子对照组基础上分别加入AICAR和化合物C作为AICAR组和化合物C组，分别培养4 h。采用Western blot法检测角膜上皮细胞磷酸化AMPK(p-AMPK)和AMPK的表达，采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定角膜上皮细胞培养上清液中IL-6质量浓度。结果:不同浓度AICAR作用于角膜上皮细胞不同时间后，细胞指数总体比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。10.0 μmol/L和12.5 μmol/L化合物C作用于角膜上皮细胞后细胞指数较未处理细胞升高。正常对照组、孢子对照组、AICAR组和化合物C组p-AMPK水平分别为0.67±0.15、2.57±0.12、3.67±0.58和1.50±0.50，各组间总体比较差异有统计学意义( F＝32.820， P<0.001)。孢子对照组p-AMPK水平较正常对照组升高，差异有统计学意义( P<0.001)；AICAR组较孢子对照组p-AMPK水平升高，化合物C组较孢子对照组p-AMPK水平降低，差异均有统计学意义(均 P＝0.010)。正常对照组、孢子对照组、AICAR组和化合物C组AMPK相对表达量总体比较差异无统计学意义( F＝0.120， P＝0.950)。正常对照组、孢子对照组、AICAR组和化合物C组IL-6质量浓度分别为(107.81±17.15)、(156.32±9.94)、(167.96±14.16)和(127.42±19.75)pg/ml，各组间总体比较差异有统计学意义( F＝15.210， P<0.001)，其中孢子对照组IL-6质量浓度较正常对照组升高，差异有统计学意义( P<0.001)；AICAR组IL-6质量浓度较孢子对照组略升高，差异无统计学意义( P＝0.260)，化合物C组IL-6质量浓度较孢子对照组降低，差异有统计学意义( P＝0.010)。 结论:角膜上皮细胞有AMPK磷酸化表达，且真菌孢子刺激角膜上皮细胞后AMPK磷酸化增强，IL-6分泌增多。

真菌;角膜炎;上皮细胞;白细胞介素6;腺嘌呤核糖核苷酸活化的蛋白激酶;磷酸化

魏静静;谢艳亭;岳娟;董军璐;司玮;王春梅;张红敏;王丽娅

郑州大学人民医院　河南省人民医院眼科　河南省立眼科医院　河南省眼科研究所　河南省眼科与视觉科学重点实验室，郑州　450003

中华实验眼科杂志

[1]魏静静;谢艳亭;岳娟;董军璐;司玮;王春梅;张红敏;王丽娅-.腐皮镰孢菌对角膜上皮细胞AMPK磷酸化及IL-6表达的影响)[J].中华实验眼科杂志,2022(02):133-138

腺嘌呤核糖核苷酸活化的蛋白激酶

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