目的:以坏死性凋亡为切入点，探讨肝纤维化抵抗D-氨基半乳糖/脂多糖（D-GalN/LPS）诱导致死性损伤的新机制。方法:建立四氯化碳（CCl 4）诱导的肝纤维化小鼠模型，于纤维化6周时以致死剂量的D-GalN/LPS进行攻击，以同样处理的正常小鼠作为对照。即实验共分为4组：对照组（Control）、急性损伤（D-GalN/LPS）组、肝纤维化（Fib）组、肝纤维化+急性攻击（Fib+D-GalN/LPS）组。定量PCR和免疫荧光法分析坏死性凋亡（necroptosis）关键信号分子受体相互作用蛋白（RIPK）1、RIPK3、混合谱系激酶结构域蛋白（MLKL）和/或P-MLKL在各组中的表达。给予正常小鼠以靶向necroptosis关键信号分子的抑制剂，再给予急性攻击，根据转氨酶水平及肝组织学的变化来评估抑制necroptosis对D-GalN/LPS触发急性肝损害的影响。建立肝纤维化自发消融模型，再给予急性攻击，免疫组织化学法分析和比较各组小鼠肝组织中necroptosis关键信号分子的表达。组间差异的比较采用 t检验或方差分析。 结果:定量PCR和免疫荧光检测结果显示，D-GalN/LPS攻击触发了RIPK1、RIPK3、MLKL和/或P-MLKL的明显上调。抑制necroptosis信号的关键分子可明显减轻D-GalN/LPS诱导的肝损害，表现为血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶水平的显著降低以及肝组织学的明显改善。纤维化肝脏中necroptosis信号分子的表达明显受到抑制。肝纤维化对D-GalN/LPS触发necroptosis的抑制随着纤维消融而逐渐削弱。结论:肝纤维化可能通过抑制D-GalN/LPS触发的necroptosis而保护小鼠抵抗急性致死性损伤的攻击。

肝纤维化;损伤抵抗;坏死性凋亡;发病机制

李璐;白丽;郑素军;陈煜;段钟平

北京大学第三医院感染疾病科，北京　100191;首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心四科　肝衰竭与人工肝治疗研究北京市重点实验室，北京　100069;首都医科大学附属北京佑安医院肝病中心一科，北京　100069

中华肝脏病杂志

[1]李璐;白丽;郑素军;陈煜;段钟平-.肝纤维化通过抑制坏死性凋亡抵抗D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的致死性损伤)[J].中华肝脏病杂志,2022(04):413-418

CCl ,Fib+D,损伤抵抗

肝纤维化,坏死性凋亡,氨基半乳糖,脂多糖,GalN,LPS,四氯化碳,小鼠模型,Control,急性损伤,免疫荧光法,necroptosis,信号分子,相互作用蛋白,RIPK3,酶结构,结构域,MLKL,肝组织,发急,肝损害,免疫组织化学法,免疫荧光检测,RIPK1,关键分,丙氨酸转氨酶,天冬氨酸转氨酶

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