目的 建立Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero 细胞)原液特异性鉴别试验的RT-PCR法,并对该方法进行验证.方法 根据GIAIDS数据库中新型冠状病毒Omicron株及其他突变株和原型株的S基因序列差异设计并合成引物OSTF1、OS1R,提取Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液病毒RNA,逆转录为cDNA,利用对Omicron株S蛋白基因序列中的特异性插入及缺失核苷酸序列设计的引物对进行PCR扩增,扩增产物进行1％琼脂糖凝胶电泳鉴定.对建立的RT-PCR法进行重复性、中间精密度、专属性、耐用性及灵敏度验证,并用该方法鉴别6批Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗原液.结果 Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液利用引物OSTF1/OS1R进行RT-PCR检测,可扩增出约460 bp的条带,而原型株、Beta株、Delta株新型冠状病毒灭活疫苗原液(Vero细胞)均无法扩增出条带;重复3次检测、2名实验人员分别在3 d重复3次检测、利用3种不同退火温度进行RT-PCR,Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液均可扩增出约460 bp的条带;原液蛋白浓度在0.04 μg/mL以上、RNA浓度在0.128 ng/μL以上均可扩增出较亮的约460 bp的条带;6批Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液经RT-PCR检测,均可见约460 bp的条带.结论 RT-PCR法专属性、重复性、中间精密度、耐用性和灵敏度均良好,可用于Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液鉴别.

Omicron株新型冠状病毒;灭活疫苗;原液;鉴别试验;RT-PCR

杨安纳;庞德钦;周以斯;杨洁;杨东升;吴杰;孟胜利;王泽鋆;郭靖;申硕

武汉生物制品研究所有限责任公司,湖北武汉430060

中国生物制品学杂志

[1]杨安纳;庞德钦;周以斯;杨洁;杨东升;吴杰;孟胜利;王泽鋆;郭靖;申硕-.Omicron株新型冠状病毒灭活疫苗(Vero细胞)原液特异性鉴别试验RT-PCR法的建立及验证)[J].中国生物制品学杂志,2022(06):700-705

GIAIDS,OSTF1,OS1R

Omicron,新型冠状病毒灭活疫苗,Vero,原液,鉴别试验,突变株,基因序列,序列差异,并合,引物,逆转录,cDNA,序列设计,扩增产物,琼脂糖凝胶电泳,电泳鉴定,精密度,专属性,耐用性,bp,条带,Beta,Delta,名实,实验人员,退火温度,蛋白浓度

0.121166