目的 阐明Casitas B系淋巴瘤(CBL)蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制.方法 乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF7常规培养,实验分为NC组、过表达CBL组和siNC组、siCBL组,采用克隆形成法和细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、伤口愈合实验、Transwell实验检测过表达(沉默)CBL对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot验证CBL对乳腺癌细胞周期进程、细胞周期标志物和上皮-间充质转化(EMT)的影响;罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架观察CBL对细胞丝状伪足数量的影响.采用IP-质谱法筛选CBL的相互作用蛋白并确定NCK2为研究对象.实验分为CBL组、NCK2组、CBL+NCK2组,通过免疫共沉淀(IP)和免疫荧光共定位实验验证CBL与NCK2蛋白互作情况.通过环己酰亚胺追踪实验和泛素化实验检测CBL对NCK2蛋白稳定性和泛素化的影响.采用CCK-8和Transwell实验检测NCK2对CBL介导的乳腺癌细胞增殖及迁移能力的影响.结果 过表达CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低(P<0.05);沉默CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加(P<0.01).沉默CBL促进MCF7细胞周期G1/S转换(P<0.05).过表达CBL下调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4(P<0.01)、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2(P<0.05)、EMT相关蛋白Snail、N-Cadherin、Claudin-1(P<0.05),同时上调E-Cadherin(P<0.05);沉默CBL上调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4/6(P<0.05)、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2(P<0.05),EMT相关蛋白Snail、Vimentin、Claudin-1(P<0.05),同时下调E-Cadherin(P<0.05).过表达CBL使乳腺癌细胞系MDA-MB-231中丝状伪足数量减少;沉默CBL使乳腺癌细胞系MCF7中丝状伪足数量增加.NCK2与CBL相互作用.过表达CBL抑制NCK2蛋白稳定性(P<0.05),并促进其泛素降解(P<0.01).过表达NCK2能够逆转CBL介导的乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用(P<0.01).结论 CBL可通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭.

CBL;酪氨酸激酶非催化区蛋白2;E3连接酶;泛素化;细胞增殖;细胞侵袭

宋筱羽;肖斌;陆景润;张文武;李锦潮;竹昕;孙朝晖;李林海

南方医科大学检验与生物技术学院,广东 广州 510515;广州医科大学附属第六医院,清远市人民医院检验医学部,广东清远 511500;贵阳市第一人民医院医学检验科,贵州 贵阳 550002;中国人民解放军南部战区总医院检验科,广东 广州 510010

南方医科大学学报

[1]宋筱羽;肖斌;陆景润;张文武;李锦潮;竹昕;孙朝晖;李林海-.CBL通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭)[J].南方医科大学学报,2022(11):1594-1603

NCK2,siCBL,CBL+NCK2

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