目的 初步探索日本血吸虫G蛋白偶联受体89(SjGPR89)在日本血吸虫生长发育中的作用.方法 利用SMART网站和TMHMM网站预测其SjGPR89蛋白的蛋白结构和跨膜结构.取40只SPF级6～8周龄雌性昆明小鼠经腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(200±10)条/鼠,分别于感染后第14、16、18、20、22、24、26、28、30天解剖小鼠,收集虫体,提取虫体RNA并逆转录为cDNA,采用qRT-PCR检测SjGPR89 mRNA在血吸虫中的相对转录水平.取12只SPF级6～8周龄雌性昆明小鼠,经腹部贴片法感染日本血吸虫尾蚴(60±2)条/鼠,随机平均分为SjGPR89干扰组(干扰组)和对照组,干扰组于感染后第1、6、10、14、18、22、26天经尾静脉注射SjGPR89双链RNA(dsRNA)10μg/鼠,对照组注射等量绿荧光蛋白(GFP)dsRNA.小鼠感染后第30天收集虫体,取雌、雄虫各5条,提取虫体RNA,逆转录为cDNA,采用qRT-PCR检测虫体SjGPR89 mRNA相对转录水平;用多聚甲醛乙酸乙醇(AFA)固定分开的雌、雄虫后,采用Image J软件测量虫长,并统计虫荷;采用卡红染色对雌、雄虫的性腺进行染色,荧光显微镜下观察生殖腺发育状态的变化.另取12只SPF级6～8周龄雌性昆明小鼠,经腹部贴片法感染尾蚴(40±2)条/鼠,随机平均分为干扰组和对照组,干扰组于小鼠感染后第26、30、34、38天经尾静脉注射10 μg dsRNA/鼠,于第42天解剖小鼠,取肝组织,qRT-PCR检测肝组织中胶原I、胶原Ⅲ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的相对转录水平;肝组织经5％NaOH消化后,计数每克肝组织虫卵数;制备肝切片,Masson染色后镜下观察肝纤维化程度.结果 TMHMM网站预测结果显示,SjGPR89为一种较保守的9次跨膜的G蛋白偶联受体;SMART网站预测结果显示,SjGPR89蛋白由4个跨膜区域、1个高尔基pH调节受体(GPHR)结构域、1个低复杂度区域和一个脱落酸(ABA)G蛋白偶联受体(GPCR)结构域组成.qRT-PCR检测结果显示,小鼠体内不同发育时期(14～30d)日本血吸虫的SjGPR89 mRNA相对转录水平较平稳,仅雌虫在感染小鼠后的第26～28天有大幅上升.感染后第30天,qRT-PCR检测结果显示,干扰组雌、雄血吸虫中SjGPR89的mRNA相对转录水平分别为307.70±58.21、97.88±11.38,较对照组的767.10±142.79、182.02±7.42(t=5.96、12.39,均 P＜0.01)敲低了 59.89％和 46.23％;干扰组雌、雄虫的虫长分别为(12.13±2.67)、(10.00±1.72)mm,较对照组的(13.67±1.74)、(11.48±1.94)mm(t=4.10、5.09,均P＜0.01)减短了 11.22％和12.93％;干扰组雌、雄虫的虫荷数分别为(23.00±1.83)、(23.75+2.99)条,较对照组的(26.75±0.96)、(31.00±3.56)条(t=3.64、3.12,均 P＜0.05)减少了 14.02％和 23.39％.卡红染色结果显示,干扰组雌虫的性腺发育出现延滞状态,卵巢和卵黄腺着色较浅,且卵巢的面积远小于对照组;雄虫的性腺发育不充分,形态大小较对照组小.干扰组的每克肝组织虫卵数为(2 777.33±197.94)个,较对照组的(5 871.32±875.25)个(t=5.97,P＜0.01)减少了 52.70％.感染后第42天,Masson染色观察结果显示,干扰组小鼠肝胶原纤维面积小于对照组;qRT-PCR检测结果显示,干扰组小鼠肝组织中的胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、α-SMA mRNA相对转录水平分别为 530.20±246.81、825.26±139.82、551.59±189.94,均低于对照组(t=3.81、2.50、4.72,均P＜0.05).结论 干扰SjGPR89蛋白可抑制日本血吸虫的生长发育、生存能力和雌虫产卵,减轻对宿主肝脏的病理损伤.

日本血吸虫;G蛋白偶联受体;SjGPR89;双链RNA干扰;生长发育

王晓玲;张卫;易存;陈祥宇;杨文彬;徐斌;胡薇

中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心),国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,世界卫生组织热带病合作中心,国家级热带病国际联合研究中心,上海200025;复旦大学生命科学学院,上海200433;内蒙古大学生命科学学院,呼和浩特010070

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

[1]王晓玲;张卫;易存;陈祥宇;杨文彬;徐斌;胡薇-.SjGPR89蛋白对日本血吸虫生长发育的影响)[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2022(06):701-707

SjGPR89,GPHR,75+2

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