目的 探讨炎症环境下含有Src同源结构域2的蛋白酪氨酸磷酸酶2(Src homology?2 domain contain?ing protein tyrosine phosphatase?2,SHP2)对人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖及成骨分化的调节作用和相关机制,为牙周炎治疗提供新的靶点.方法 使用慢病毒感染构建敲低SHP2基因的hPDLSCs细胞系,通过RT?qPCR、Western blot验证SHP2的敲低水平;使用肿瘤坏死因子?α(tumor necro?sis factor?α,TNF?α)和白细胞介素?1β(interleukin?1β,IL?1β)在体外模拟炎症环境;CCK?8检测正常及炎症条件下敲低SHP2对hPDLSCs增殖的影响;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、ALP活性检测、ARS染色、RT?qPCR以及Western blot检测成骨指标;Western blot检测敲低SHP2在炎症条件下,对丝裂原活化蛋白激酶/核因子κB(mitogen-activated protein kinase/nuclear factor-κB,MAPK/NF-κB)通路蛋白的影响.结果 慢病毒感染细胞72 h后在荧光显微镜下显示出明显的绿色荧光,测得SHP2 shRNA重组慢病毒的滴度为2.9×108 TU/mL;Western blot及RT?qPCR检测发现,SHP2敲低组的SHP2蛋白及基因的表达显著降低(P<0.001);在正常条件下,敲低SHP2在一定程度上抑制了hPDLSCs的增殖;敲低SHP2后,hPDLSCs的早期成骨指标增高,包括ALP活性显著增高,ALP和COL?1的表达增加(P<0.05),然而敲低SHP2对hPDLSCs最终产生钙结节的量无明显影响.在TNF?α和IL?1β诱导的炎症环境下,敲低SHP2对hPDLSCs的增殖无明显影响(P>0.05),敲低SHP2后,hPDLSCs成骨相关指标均增加(P<0.05),钙结节形成的量增多(P<0.05);炎症环境下,敲低SHP2后,hPDLSCs中p65的磷酸化和IκB?α的降解降低,并且NF?κB上游MAPK通路蛋白p?p38和p?JNK的表达降低(P<0.05).结论 炎症环境下,敲低SHP2对hPDLSCs的增殖无明显影响,但可通过抑制MAPK/NF?κB通路促进hPDLSCs成骨分化.

牙周膜干细胞;增殖;牙周炎;肿瘤坏死因子-α;白细胞介素-1β;炎症环境;Src同源结构域2的蛋白质酪氨酸磷酸酶2;基因沉默;成骨分化;碱性磷酸酶;COL-1;MAPK/NF-κB信号通路

张远;赵庆;吕浩东;王天丛;窦昭婧;金玉琴;季骏

南京大学医学院附属口腔医院·南京市口腔医院正畸科,江苏南京 210008

口腔疾病防治

[1]张远;赵庆;吕浩东;王天丛;窦昭婧;金玉琴;季骏-.炎症环境下敲低SHP2对人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响)[J].口腔疾病防治,2022(11):769-778

炎症环境,敲低,SHP2,人牙周膜干细胞,干细胞增殖,成骨分化,Src,结构域,蛋白酪氨酸磷酸酶,homology,domain,contain,ing,protein,tyrosine,phosphatase,human,periodontal,ligament,stem,cells,hPDLSCs,相关机制,牙周炎,慢病毒感染,细胞系,qPCR,blot,tumor,necro,sis,interleukin,体外模拟,CCK,碱性磷酸酶,alkaline,ALP,活性检测,ARS,丝裂原活化蛋白激酶,核因子,mitogen,activated,kinase,nuclear,MAPK,通路蛋白,荧光显微镜,显微镜下,shRNA,重组慢病毒,滴度,TU,白及,COL,骨相,p65,磷酸化,p38,JNK,蛋白质酪氨酸磷酸酶,基因沉默

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