目的 探讨程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对高糖环境下牙周膜干细胞(PDLSC)的增殖和成骨分化的影响.方法 体外克隆培养的PDLSC,按照如下处理方法分为3组:对照组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)和高糖+Nec-1 组(25 mmol/L葡萄糖+30 pmol/L Nec-1).通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞坏死性凋亡相关分子RIP1、RIP3的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞增殖活力,通过茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)定量检测和实时荧光定量PCR等方法分析PDLSC的成骨分化情况.使用SPSS 26.0软件进行统计分析,采用单因素方差分析比较各组间细胞增殖活力(MTT吸光度A值)、ALP表达含量及成骨相关基因(COL1、RUNX2、OCN)相对表达水平,并用LSD-t检验进行组间多重比较.结果 Western blot结果显示,高糖组PDLSC的RIP1和RIP3的表达较对照组明显增加,而高糖+Nec-1组的RIP1和RIP3的表达明显弱于高糖组.PDLSC培养7 d后,高糖组增殖活力较对照组明显降低,其吸光度A值(0.67±0.06)显著低于对照组(1.23±0.12),差异有统计学意义(t=9.652,P＜0.001);而Nec-1抑制后,PDLSC的增殖活力明显增加,高糖+Nec-1组吸光度A值(1.12±0.11)显著高于高糖组(0.67±0.06),差异有统计学意义(t=8.185,P＜0.001).经矿化诱导后,高糖组PDLSC 14d时形成的矿化结节、7d时ALP表达含量(3.42±0.37)和成骨相关基因COL1(1.86±0.16)、RUNX2(1.55±0.23)、OCN(1.08±0.20)的相对表达量均较对照组均显著减少,差异均有统计学意义(tALP=13.149,tCOL1=14.257,tRUNX2=7.593,tOCN=8.606,P均＜0.001);而Nec-1抑制后,PDLSC的成骨分化增加,高糖+Nec-1组PDLSC 14 d时形成的矿化结节、7 d时ALP表达含量(6.06±0.26)和成骨相关基因 COL1(3.64±0.30)、RUNX2(2.53±0.26)、OCN(2.14±0.30)的相对表达量较高糖组均显著升高,差异均有统计学意义(tALP=13.033,tCOL1=11.636,tRUNX2=6.332,tOCN=6.573,P均＜0.001).结论 体外培养条件下,高糖环境抑制了 PDLSC的增殖和成骨分化,而Nec-1明显改善了高糖环境下PDLSC的增殖和成骨分化.

程序性坏死特异性抑制剂-1;牙周韧带;干细胞;生物学特性;成骨分化

柳成林;荀文兴;杨海珍;范素萌;刘宇博;张红梅

空军军医大学第二附属医院口腔科,西安 710038;解放军964医院口腔科,长春130000

中华口腔医学研究杂志（电子版）

[1]柳成林;荀文兴;杨海珍;范素萌;刘宇博;张红梅-.程序性坏死特异性抑制剂-1对高糖环境下牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响)[J].中华口腔医学研究杂志（电子版）,2022(03):160-167

PDLSC,+Nec,tALP,tCOL1,tRUNX2,tOCN

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