目的 建立以有机阴离子转运多肽1B1 (OATPlB1)和OATP1B3为作用靶点的何首乌肝毒性成分快速筛选方法.方法 使用Discovery Studio 2.5软件将何首乌主要单体成分(48个)与OATP1B1/OATP1B3蛋白进行分子对接,以OATP1B1和OATP1B3主要转运底物胆红素作为阳性对照,对目标化合物进行虚拟筛选;采用CCK-8法考察芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(AEG)、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(EG)、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷(PG)、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(TSG)处理24 h后对人源肝永生化肝细胞HepaRG的毒性强弱,并采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术测定4种化合物对HepaRG细胞的OATP1B1和OATP1B3 mRNA表达量的影响.结果 与OATP1B1对接结果显示,polygonumnolide B3、cis-emodin-physcionbianthrones、polygonumnolide B2、大黄素甲醚-8-β-D-(6'-O-乙酰基)-葡萄糖苷、trans-emodin-physcionbianthrones、大黄素-3-甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷、polygonumnolide B4、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、EG、大黄素-1-O-β-D-葡萄糖苷、AEG、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-葡萄糖苷高于胆红素打分值的80％,可被初步认定为潜在毒性成分;与OATP1B3对接结果显示,trans-emodin-physcionbianthrones、PG、polygonumnolide A4及虎杖苷高于胆红素打分值的80％,可被初步认定为潜在毒性成分.CCK-8实验进一步证实AEG、EG及PG均具肝细胞毒性作用,半数抑制浓度分别为16.10、49.43、69.44 μg·mL-1,与分子对接结果一致.与对照组比较,AEG、EG均可显著下调OATP1B1的mRNA表达水平(P＜0.05);PG可显著下调OATP1B3的mRNA表达水平(P＜0.05).结论 以OATP 1B 1/OATP 1B3分子对接技术为切入点,可有效预测何首乌潜在肝毒性成分,实现快速高效的高通量筛选,为中药安全性评价提供新思路.

何首乌;有机阴离子转运多肽1B1 (OATP1B1);有机阴离子转运多肽1B3 (OATP1B3);分子对接;肝毒性;安全评价;芦荟大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷;大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷;大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷

汪祺;文海若;马双成

中国食品药品检定研究院,北京 100050

药物评价研究

[1]汪祺;文海若;马双成-.以OATP1B1/OATP1B3转运体为作用靶点的何首乌肝毒性成分筛选)[J].药物评价研究,2022(02):227-233

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