目的:筛选早期胰腺癌患者血清外泌体差异表达的微小RNA(microRNA，miRNA)，并评估外泌体hsa-let-7f-5p对早期胰腺癌的诊断价值。方法:选取2019年1月至2020年1月间南京中医药大学附属医院行手术并经病理证实的19例早期胰腺癌患者(早期胰腺癌组)和16例慢性肿块型胰腺炎患者(胰腺炎组)，收集两组患者的血清样本，同时选取19名健康志愿者的血清样本作为正常对照组。采用exoEasy Maxi Kit试剂盒分离血清外泌体，透射电子显微镜(TEM)下观察外泌体的结构特征，纳米颗粒追踪分析观察外泌体的粒径大小，蛋白质免疫印迹法检测外泌体表面特异性蛋白标志物CD 63、CD 81表达。利用miRNeasy Serum/Plasma Kit试剂盒抽提外泌体总RNA，对其进行质检后构建小RNA文库，参照小RNA数据库，对早期胰腺癌组、胰腺炎组及正常对照组差异表达的外泌体miRNA进行筛选。通过实时荧光定量PCR法验证候选外泌体miRNA的表达量，分析各组miRNA的表达量差异。应用基因本体(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集通路分析候选miRNA的靶基因及代谢通路在早期胰腺癌发生与发展中的作用。 结果:TEM可见外泌体特征性碟形双层囊膜结构，粒径主峰在150 nm左右，外泌体特异性蛋白CD 63、CD 81表达阳性，对比早期胰腺癌组与胰腺炎组和正常对照组miRNA表达的差异，筛选获得特异性的肿瘤标志物外泌体hsa-let-7f-5p，其在早期胰腺癌组中的表达显著高于胰腺炎组及正常对照组( P值均<0.05)。ROC曲线分析结果显示，外泌体hsa-let-7f-5p鉴别早期胰腺癌组和胰腺炎组的AUC值为0.843(95% CI0.640~1.000)，灵敏度和特异度分别为100%和81.82%，鉴别早期胰腺癌组和正常对照组的AUC值为1.000(95% CI1.000~1.000)，灵敏度和特异度均为100%，其诊断早期胰腺癌效能与CA19-9相当( P>0.05)。GO分析结果显示，外泌体hsa-let-7f-5p的靶基因主要参与补体激活凝集素途径，表达蛋白主要分布于纤毛层，分子多发挥与一氧化氮合酶结合的功能。KEGG通路富集分析结果表明，外泌体hsa-let-7f-5p的靶基因与MAPK信号通路关系密切。 结论:血清外泌体hsa-let-7f-5p可作为早期胰腺癌诊断的潜在标志物。

胰腺肿瘤;外泌体;微小RNA;糖类抗原19-9;胰腺炎，慢性

李源;任帅;曹营营;郭凯;杨梦;赵雅桐;张雅平;王中秋

南京中医药大学附属医院（江苏省中医院）放射科，南京　210000

中华胰腺病杂志

[1]李源;任帅;曹营营;郭凯;杨梦;赵雅桐;张雅平;王中秋-.早期胰腺癌患者血清外泌体差异miRNA筛选及hsa-let-7f-5p的诊断价值)[J].中华胰腺病杂志,2022(06):432-438

exoEasy,miRNeasy

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