目的:探讨细菌外膜囊泡（OMVs）肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8 + T细胞浸润的影响。 方法:采用实验研究方法。采用卵清蛋白（OVA）慢病毒载体质粒pLV-EF1a-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro构建小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞；采用大肠杆菌来源ClyA-Catchers-OMVs（CC-OMVs）与标签化抗原肽SpyTag-OVA制备OMVs肿瘤疫苗；应用OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠CD8 + T细胞生成，采用体外细胞杀伤实验（OMVs肿瘤疫苗刺激T细胞组和对照T细胞组）、小鼠皮下胰腺癌成瘤模型（OMVs肿瘤疫苗组和对照组）和免疫组织化学染色检测分析OMVs肿瘤疫苗抑制胰腺癌细胞增殖，刺激CD8 + T细胞浸润的效果。观察指标：（1）小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞鉴定情况。（2）CC-OMVs形态观察情况。（3）OMVs肿瘤疫苗特异性T细胞对小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞增殖抑制情况。（4）OMVs肿瘤疫苗对小鼠胰腺癌的抑制情况。（5）OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠胰腺癌组织CD8 + T细胞浸润情况。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用 t检验。计数资料以绝对数或百分率表示。 结果:（1）小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞鉴定情况。激光共聚焦检测结果显示：感染OVA慢病毒载体质粒pLV-EF1a-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro的小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞表达mNeongreen绿色荧光。流式细胞检测结果显示：以小鼠胰腺癌Pan02细胞为参照，Pan02-OVA细胞Flag蛋白表达率为90.7%。（2）CC-OMVs形态观察情况。透射电子显微镜检测结果显示：CC-OMVs呈均匀球形，直径<50 nm。（3）OMVs肿瘤疫苗特异性T细胞对小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞增殖抑制情况。细胞增殖毒性检测结果显示：OMVs肿瘤疫苗刺激T细胞组小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞450 nm吸光度为0.41±0.12，对照T细胞组为1.05±0.15，两组比较，差异有统计学意义（ t=9.54， P<0.05）。（4）OMVs肿瘤疫苗对小鼠胰腺癌的抑制情况。OMVs肿瘤疫苗组小鼠背部皮下肿瘤组织质量为（81±10）g，对照组为（153±17）g，两组比较，差异有统计学意义（ t=8.26， P<0.05）。（5）OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠胰腺癌组织CD8 + T细胞浸润情况。免疫组织化学染色检测结果显示：OMVs肿瘤疫苗组小鼠背部皮下肿瘤组织中CD8 + T细胞染色数目为（28.7±3.5）个，对照组为（9.3±1.5）个，两组比较，差异有统计学意义（ t=8.74， P<0.05）。 结论:细菌OMVs肿瘤疫苗可抑制胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖并提高肿瘤组织中CD8 + T细胞浸润数目。

胰腺肿瘤;细菌外膜囊泡;肿瘤疫苗;免疫治疗;动物模型;治疗效果

陈志强;马娜娜;赵潇;高松;郝继辉

天津医科大学肿瘤医院胰腺肿瘤科　国家肿瘤临床医学研究中心　天津市“肿瘤防治”重点实验室　天津市恶性肿瘤临床医学研究中心，天津　300060;中国科学院纳米生物效应与安全性重点实验室　国家纳米科学中心，北京　100190

中华消化外科杂志

[1]陈志强;马娜娜;赵潇;高松;郝继辉-.细菌外膜囊泡肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8 + T细胞浸润的影响 )[J].中华消化外科杂志,2022(04):530-536

hluc,mNeongreen,3Xflag,Pan02,ClyA,Catchers

细菌外膜囊泡,肿瘤疫苗,肿瘤细胞增殖,CD8 ,细胞浸润,OMVs,实验研究方法,卵清蛋白,OVA,慢病毒载体,质粒,pLV,EF1a,P2A,CMV,puro,大肠杆菌,CC,标签化,SpyTag,体外细胞,杀伤,成瘤,免疫组织化学染色,检测分析,胰腺癌细胞,细胞鉴定,定情,形态观察,增殖抑制,胰腺癌组织,正态分布,绝对数,百分率,共聚,Flag,透射电子显微镜,显微镜检测,增殖毒性,毒性检测,吸光度,背部,肿瘤组织,细胞染色,色数,可抑制,胰腺肿瘤,免疫治疗,动物模型

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