目的 使用人肝癌HepG2细胞筛选亚硝胺的体外彗星试验的S9 mix配方,并对17种常见的亚硝胺化合物开展彗星试验,研究其DNA亲和力和碱基嵌入风险.方法 在非S9活化和S9活化条件下对HepG2细胞进行N-二 甲基亚硝胺(NDMA)、N-二乙基亚硝胺(NDEA)、N-亚硝基二丁胺(NDBA)、N-亚硝基二异丙胺(NDIPA)、N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)、N-亚硝基甲乙胺(NMEA)、N-亚硝基-N-乙基异丙胺(NEIPA)、N-亚硝基二丙胺(NDPA)、N-甲基-N-亚硝基苯胺(NMPA)、亚硝基二苯胺(NDPh)、二乙醇亚硝胺(NDELA)、亚硝基吗啉(NMOR)、亚硝基-N-甲基-N-(2-苯基)乙胺(NMPEA)、亚硝基吡咯烷(NPYR)、亚硝基哌啶(NPIP)、4-甲基亚硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基降烟碱(NNN)给药处理,2种条件均设置溶媒对照(0.5％DMSO)、3个浓度梯度的给药组和阳性对照组,在非S9活化条件下以甲基磺酸甲酯(MMS)为阳性对照,S9活化条件下以环磷酰胺(CP)为阳性对照.以NDMA和NDEA为例比较3种S9mix配方对亚硝胺化合物体外DNA亲和力和DNA损伤风险,选择效果最优者开展剩余化合物在S9条件下的彗星试验,计算各组尾DNA含量百分率(％tailDNA)的平均值和中位数.结果 在非S9代谢活化条件下17种常见亚硝胺化合物均未导致HepG2细胞核DNA明显损伤.S9 mix配方C中S9体积分数仅为3.36％,但对亚硝胺化合物的代谢活化效果最佳.在该条件下,除NDPh外,其余亚硝胺化合物均对HepG2细胞存在DNA的损伤作用.烷基类亚硝胺化合物对DNA损伤作用强弱顺序依次为NDMA＞NEIPA＞NDPA＞NMEA＞NDEA＞NDBA＞NDIPA,与化合物α氢的数目基本呈正相关.含苯基的亚硝胺化合物对DNA损伤作用强弱顺序依次为NMPEA＞NMPA＞NDPh,而环状亚硝胺化合物对DNA损伤作用强弱顺序为NMOR＞NPIP≈NPYR.结论 提供最新的亚硝胺化合物体外DNA损伤风险数据,并提出适宜亚硝胺化合物的体外彗星试验S9mix配方,为亚硝胺化合物的毒性评价提供手段.

亚硝胺化合物;DNA损伤;体外彗星试验;HepG2细胞;代谢活化

文海若;叶倩;于敏;王雪;汪祺;耿兴超

中国食品药品检定研究院,北京 100050

药物评价研究

[1]文海若;叶倩;于敏;王雪;汪祺;耿兴超-.亚硝胺化合物对人源肝癌细胞HepG2的DNA损伤风险评价)[J].药物评价研究,2022(11):2200-2207

体外彗星试验,NDPh,NMPEA,S9mix,tailDNA

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