目的 观察Toll样受体3激动剂聚肌胞苷酸[polyinosinic-polycytidylic acid,Poly(I:C)]感染的小鼠肝脏组织及人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)炎性反应情况,探讨Wnt3a在Toll样受体3介导的肝脏炎症中的作用及可能机制.方法 清洁级C57BL/6小鼠18只,随机分为对照组、Poly(I:C)组、Wnt3a+Poly(I:C)组各 6 只.Poly(I:C)组小鼠腹腔注射 Poly(I:C)10 μg/kg,Wnt3a+Poly(I:C)组小鼠腹腔注射 Wnt3a 1 μg/kg+Poly(I:C)10 μg/kg,制备小鼠肝脏炎症模型;对照组小鼠腹腔注射PBS 10 μg/kg.建模3 h,采用ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-12水平;建模6 h,3组小鼠肝组织行组织病理检查,采用HE染色和免疫荧光染色观察肝组织LY-6G+中性粒细胞浸润情况.取5名健康志愿者静脉血各10 mL,分离外周血PBMCs,将分离的PBMCs细胞分为PBMCs对照组、PBMCs+Poly(I:C)组、PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组.PBMCs+Poly(I:C)组细胞加入 Poly(I:C)1 mg/L,PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组细胞加入 Wnt3a 10 μg/L+Poly(I:C)1 mg/L,PBMCs对照组细胞加等量培养基.处理24 h后,采用ELISA法检测3组细胞TNF-α、IL-6、IL-12水平,采用Western blot法检测3组细胞处理150 min时p-糖原合成酶激酶3 beta、β-catenin、p-核因子κB、NF-κB抑制因子蛋白相对表达量.结果 Poly(I:C)组、Wnt3a+Poly(I:C)组小鼠血清TNF-α[(648.83±138.40)、(335.17±68.42)ng/L]、IL-6[(2 028.00±243.80)、(1 453.17±159.34)ng/L]、IL-12[(1 716.33±211.25)、(1 229.50±139.97)ng/L]水平均高于对照组[(32.33±27.01)、(319.50±103.41)、(124.00±30.69)ng/L](P＜0.05),Poly(I:C)组均高于Wnt3a+Poly(I:C)组(P＜0.05).Poly(I:C)组小鼠建模6 h后肝脏组织LY-6G+中性粒细胞数量多于对照组和 Wnt3a+Poly(I:C)组.3 组细胞处理 24 h 后,PBMCs+Poly(I:C)组、PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组细胞TNF-α[(1 620.67±70.87)、(1 088.00±150.88)ng/L]、IL-6[(2 721.11±170.07)、(1 166.00±191.16)ng/L]、IL-12[(1 271.67±67.30),(910.00±79.90)ng/L]水平均高于 PBMCs 对照组[(22.00±8.19)、(240.33±69.79)、(29.33±13.65)ng/L](P＜0.05),PBMCs+Poly(I:C)组均高于 PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组(P＜0.05).3 组细胞处理150 min 时,PBMCs+Poly(I:C)组、PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组 NF-κB 抑制因子蛋白相对表达量(0.13±0.01、0.18±0.02)低于 PBMCs 对照组(0.23±0.03)(P＜0.05),PBMCs+Poly(I:C)组低于 PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组(P＜0.05);PBMCs+Poly(I:C)组、PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组 p-核因子 κB 蛋白相对表达量(0.46±0.05、0.30±0.02)均高于 PBMCs 对照组(0.19±0.04)(P＜0.05),PBMCs+Poly(I:C)组高于 PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组(P＜0.05);PBMCs+Poly(I:C)组、PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组 p-糖原合成酶激酶 3 beta(0.38±0.03、0.48±0.03)、β-catenin(0.35±0.05、0.48±0.05)蛋白相对表达量均高于 PBMCs 对照组(0.35±0.01、0.14±0.04)(P＜0.05),PBMCs+Wnt3a+Poly(I:C)组均高于 PBMCs+Poly(I:C)组(P＜0.05).结论 Wnt3a 通过降低炎性因子 TNF-α、IL-12、IL-6水平,调控Wnt/β-catenin信号通路抑制Toll样受体3介导的肝脏炎性反应,可能对相关肝脏炎症有治疗作用.

肝脏;炎症;小鼠;Wnt3a;Toll样受体3

殷辉;毛重山;曾艳丽;李威;康谊

郑州大学人民医院河南省人民医院感染性疾病科河南省肝病重点实验室,河南郑州 450003

中华实用诊断与治疗杂志

[1]殷辉;毛重山;曾艳丽;李威;康谊-.Wnt3a在Toll样受体3介导的肝脏炎症中作用)[J].中华实用诊断与治疗杂志,2022(06):596-600

Wnt3a+Poly,kg+Poly,PBMCs+Poly,PBMCs+Wnt3a+Poly,L+Poly

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