典型文献
LncRNA-GAS5对鲍曼不动杆菌降解HeLa细胞中SNAP29的调控作用
文献摘要：
本文旨在构建LncRNA-GAS5(长链非编码RNA-生长抑制特异性转录本5,long non-coding RNA-growth arrest-specific transcript 5)的真核过表达载体及敲减载体,研究鲍曼不动杆菌对突触体相关蛋白29(synaptosomal-associated protein 29,SNAP29)表达的影响及LncRNA-GAS5在其中发挥的调控作用.采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增LncRNA-GAS5基因,将其克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,形成pcDNA3.1-GAS5真核表达载体;通过RNA干扰技术,设计敲减GAS5的寡核苷酸序列,将其构建至pRNAT-U6.1/Neo载体中,形成pRNAT-U6.1-GAS5敲减载体;采用实时荧光定量PCR法检测GAS5的表达,以确定是否成功过表达和敲减;采用蛋白免疫印迹法检测过表达或敲减GAS5后HeLa细胞中SNAP29表达的变化,并检测鲍曼不动杆菌感染HeLa细胞后不同时间点SNAP29的表达,以及敲减或过表达GAS5后再感染鲍曼不动杆菌的HeLa细胞中SNAP29的表达.结果显示:pcDNA3.1-GAS5和pRNAT-U6.1-GAS5构建成功;pcDNA3.1-GAS5可使LncRNA-GAS5在HeLa细胞中大量表达,而pRNAT-U6.1-GAS5可使HeLa细胞中GAS5表达明显减少;过表达LncRNA-GAS5可使HeLa细胞中SNAP29表达减少,而敲减LncRNA-GAS5可使SNAP29表达增加;随着鲍曼不动杆菌感染时间延长,HeLa细胞中SNAP29的表达减少,敲减LncRNA-GAS5可使SNAP29表达回复,而过表达LncRNA-GAS5可增强SNAP29的降解.结果提示,本研究成功构建了LncRNA-GAS5的过表达和敲减载体,并发现其对SNAP29表达具有负向调控作用,表明鲍曼不动杆菌对SNAP29的降解依赖LncRNA-GAS5,为进一步探讨鲍曼不动杆菌引起细胞自噬降解障碍的深层机制奠定了理论基础.
文献关键词：
鲍曼不动杆菌;LncRNA-GAS5;SNAP29;HeLa细胞
中图分类号：
作者姓名：
丁文一;安志远
作者机构：
中国医学科学院北京协和医院检验科,北京 100730;首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心,北京 100020
文献出处：
引用格式：
[1]丁文一;安志远-.LncRNA-GAS5对鲍曼不动杆菌降解HeLa细胞中SNAP29的调控作用)[J].微生物与感染,2022(04):220-226
A类：
synaptosomal,pRNAT
B类：
LncRNA,GAS5,鲍曼不动杆菌,HeLa,SNAP29,长链非编码,生长抑制,转录本,long,coding,growth,arrest,specific,transcript,真核过表达,过表达载体,敲减,减载,突触,associated,protein,聚合酶链反应,polymerase,chain,reaction,pcDNA3,真核表达载体,干扰技术,寡核苷酸,U6,Neo,功过,蛋白免疫印迹法,不同时间点,再感染,回复,而过,细胞自噬
AB值：
0.185002
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