目的 利用慢病毒载体构建稳定过表达miR-155的AB 8/13细胞株(AB 8/13-LV-has-miR-155)和稳定敲低miR-155的AB 8/13细胞株(AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton),为研究miR-155在足细胞焦亡和肾脏疾病中的作用奠定基础.方法 体外培养AB 8/13细胞,使用不同浓度嘌呤霉素刺激AB 8/13细胞48 h,在光学显微镜下观察AB 8/13细胞的死亡情况;使用LV-has-miR-155阴性对照病毒、LV-has-miR-155-5p inhibiton阴性对照病毒分别感染AB 8/13细胞,在荧光显微镜下观察AB 8/13细胞的状态和感染效率;在嘌呤霉素筛选出稳定细胞株后,通过实时荧光定量PCR法检测稳定细胞株的miR-155表达量.结果 在3.5μg/mL及以上浓度的嘌呤霉素作用于AB 8/13细胞48 h后,所有细胞全部死亡.LV-has-miR-155慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80％的最佳条件为在含HiTransG P的完全培养基中进行感染,MOI为10;LV-has-miR-155-5p inhibiton慢病毒感染AB 8/13细胞的感染效率达到80％的最佳条件为在含HiTransG A的完全培养基中进行感染,MOI为100.qRT-PCR结果显示AB 8/13-LV-has-miR-155细胞株的miR-155表达量明显升高,AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton细胞株的miR-155表达量降低.结论 成功构建AB 8/13-LV-has-miR-155稳定细胞株和AB 8/13-LV-has-miR-155p inhibiton稳定细胞株,为进一步探究miR-155在人足细胞焦亡中的作用机制奠定基础.

AB 8/13细胞;慢病毒载体;miR-155

唐志明;林栩;梁钊;王晨;韦美理;王蓉;吴昱升;黄慕源

右江民族医学院附属医院肾内科,广西百色533000;广西免疫相关性疾病医学科研基础保障重点实验室,广西百色533000

右江医学

[1]唐志明;林栩;梁钊;王晨;韦美理;王蓉;吴昱升;黄慕源-.慢病毒载体介导过表达和敲低miR-155的AB 8/13细胞株的建立)[J].右江医学,2022(05):321-327

155p,inhibiton,HiTransG

慢病毒载体,过表达,敲低,miR,AB,载体构建,LV,has,足细胞,细胞焦亡,肾脏疾病,体外培养,嘌呤霉素,光学显微镜,显微镜下,死亡情况,荧光显微镜,稳定细胞株,慢病毒感染,最佳条件,MOI,qRT

0.131538