典型文献
黄蜀葵花总黄酮通过激活AMPK/mTOR通路调控自噬改善克罗恩病肠道纤维化
文献摘要：
目的:观察黄蜀葵花总黄酮(total flavone of Abelmoschus manihot,TFA)对肠道成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)的影响,探讨TFA治疗克罗恩病肠道纤维化的机制.方法:从SD大鼠中分离原代肠道成纤维细胞(intestinal fibroblasts,IFs),使用免疫荧光法鉴定细胞特征.利用胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)构建IFs细胞模型,随机分为对照组、模型组和TFA低、中、高剂量(5、10、50μg/mL)组.CCK-8法检测TFA及雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对IFs细胞最佳干预条件.通过免疫荧光法检测LC3Ⅱ、Beclin-1、ATG16L1及p62等自噬有关蛋白表达,使用mRFP-GFP-LC3实验检测自噬流水平.采用Western blot和qRT-PCR法测定Collagen I水平.用AMPK抑制剂化合物C(Compound C,CC)、mTOR抑制剂RAPA联合TFA处理IGF-1刺激的IFs细胞,将细胞随机分为对照组、模型组、TFA(10μg/mL)组、TFA+CC组、TFA+RAPA组.采用免疫荧光及mRFP-GFP-LC3实验检测自噬水平.运用Western blot和qRT-PCR法评估Collagen I水平.采用Western blot法检测p-AMPK、p-MTOR、p-p70S6K和p-4EBP1蛋白表达.结果:免疫荧光结果显示,原代细胞具有Vimentin(+),α-SMA(-)的特征,证明其为肠道成纤维细胞.CCK-8结果提示,TFA最佳干预浓度为5、10、50μg/mL,时间为48 h;RAPA最佳干预浓度为5 nmol/mL,时间为48 h.与对照组相比,模型组的Collagen I蛋白及mRNA水平上升(P<0.01),自噬有关蛋白LC3Ⅱ、Beclin-1、ATG16L1等表达减弱,p62表达上升,自噬流减少,p-AMPK/AMPK比值降低,p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K和p-4EBP1/4EBP1比值升高(P<0.01).与模型组相比,TFA各剂量组Collagen I水平降低(P<0.01),自噬水平上升,其中高剂量组最明显;TFA(10μg/mL)组p-AMPK/AMPK比值上调,p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K和p-4EBP1/4EBP1比值下调(P<0.01).与TFA组相比,TFA+CC组中CollagenⅠ水平升高(P<0.01),自噬水平下降,p-AMPK/AMPK比值下降,p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K和p-4EBP1/4EBP1比值上升(P<0.01);TFA+RAPA组中CollagenⅠ水平降低(P<0.01),自噬水平上升,p-AMPK/AMPK比值增加,p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K和p-4EBP1/4EBP1比值降低(P<0.01).结论:TFA可以通过激活AMPK/mTOR通路调节细胞自噬以抑制Ⅰ型胶原蛋白生成,改善肠道纤维化.
文献关键词：
肠道纤维化;克罗恩病;黄蜀葵花总黄酮;肠道成纤维细胞;自噬
中图分类号：
作者姓名：
张慧翔;张丹;钱海华;王雅丽;曾莉
作者机构：
南京中医药大学第一临床医学院,江苏 南京 210023;江苏省中医院,江苏 南京 210023
文献出处：
引用格式：
[1]张慧翔;张丹;钱海华;王雅丽;曾莉-.黄蜀葵花总黄酮通过激活AMPK/mTOR通路调控自噬改善克罗恩病肠道纤维化)[J].中医药信息,2022(07):1-10,26
A类：
黄蜀葵花总黄酮,Abelmoschus,肠道成纤维细胞,IFs,TFA+CC,TFA+RAPA
B类：
AMPK,mTOR,克罗恩病,肠道纤维化,total,flavone,manihot,胶原蛋白,Collagen,intestinal,fibroblasts,免疫荧光法,胰岛素样生长因子,insulin,like,growth,IGF,细胞模型,高剂量,CCK,雷帕霉素,rapamycin,LC3,Beclin,ATG16L1,p62,mRFP,GFP,实验检测,自噬流,blot,qRT,Compound,MTOR,p70S6K,4EBP1,原代细胞,Vimentin,SMA,nmol,白及,平降,细胞自噬
AB值：
0.165521
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