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探针ASPCR检测肺炎支原体微量耐药突变A2063G方法的建立
文献摘要：
目的 建立能够特异性检测微量肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,MP)A2063G耐药突变基因的特异性扩增等位基因的探针法实时定量PCR(probe-based allele-specific real-time PCR,探针ASPCR)方法.方法 建立特异性检测A2063G耐药突变位点的探针ASPCR方法,并验证其灵敏度、特异度及准确度等性能.结果 特异性扩增2063G和非特异性扩增2063A/G的引物/探针组合分别扩增105拷贝野生基因型(2063A)模板的Ct值的差(△ Ct)高达10.93,能够特异性检测A2063G突变.探针ASPCR方法检测2063G基因型占总MP的比例的准确度可低至1％;检测MP的灵敏度低至10拷贝,检测A2063G耐药突变比例的灵敏度低至0.01％.探针ASPCR方法与前期建立的染料ASPCR方法检测临床样本的MP感染结果一致,MP阳性检出率均为94.83％(55/58),高于传统巢式PCR联合测序方法的检测结果(75.86％,44/58);染料ASPCR方法检测MP耐药率为70.91％(39/55),高于探针ASCR方法的检测结果63.64％(35/55).结论 新建探针ASPCR方法是一种具有高特异度、准确度和灵敏度的快速检测MP微量A2063G耐药突变的方法;与染料ASPCR方法相比,探针ASPCR方法检测耐药MP的灵敏度略低,但其临床样本检测复查率也低于染料ASPCR方法,且其结果判读简单,更适合在临床中应用推广,能够为临床制定MP及耐药MP感染的治疗方案提供理论依据.
文献关键词：
肺炎支原体;ASPCR;实时定量;探针;23SrRNA;A2063G;咽拭子
中图分类号：
作者姓名：
郭东星;胡文娟;李丹;李静宜;吴赵永;栗绍刚;田秀君;辛德莉
作者机构：
100050,首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所;100050北京,民航总医院儿科
文献出处：
引用格式：
[1]郭东星;胡文娟;李丹;李静宜;吴赵永;栗绍刚;田秀君;辛德莉-.探针ASPCR检测肺炎支原体微量耐药突变A2063G方法的建立)[J].传染病信息,2022(05):418-425
A类：
ASPCR,2063G,2063A,ASCR
B类：
肺炎支原体,A2063G,特异性检测,Mycoplasma,pneumoniae,MP,突变基因,等位基因,探针法,实时定量,probe,allele,specific,real,耐药突变位点,非特异性扩增,引物,探针组,拷贝,基因型,Ct,染料,临床样本,阳性检出率,耐药率,快速检测,略低,复查,结果判读,应用推广,23SrRNA,咽拭子
AB值：
0.205317
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