目的 探究血栓通注射液对神经元氧化应激损伤及缺血缺氧的作用及对Hedgohog-Patched-Smoothened信号通路的影响.方法 (1)SY5Y细胞分为对照组、偶氮二异丁脒盐酸盐[2,2'-Azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochl-oride,AAPH]组、AAPH+血栓通注射液组,使用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,观察AAPH和血栓通注射液对细胞存活的影响,并寻找AAPH和血栓通注射液处理的合适浓度;(2)小鼠胎鼠皮层神经元细胞原代培养,分为对照组、AAPH组、AAPH+血栓通注射液组,使用CCK-8试剂盒检测细胞存活率;小鼠胎鼠皮层神经元细胞原代培养,分为对照组、氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)组和OGD+血栓通注射液组,使用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,观察AAPH、OGD和血栓通注射液对细胞存活的影响;(3)对神经元进行OGD处理,同时给予SAG(Hedgohog信号通路激活剂)、cyclopamine(Hedgohog信号通路抑制剂)、血栓通注射液药物,利用实时定量PCR的方法检测Gli1的表达;(4)对SC8细胞进行OGD处理,同时给予cyclopamine、血栓通注射液药物,用激光共聚焦显微镜观察 β-arrestin-GFP(βarr2-GFP)的分布.结果 (1)与对照组相比,AAPH组SY5Y细胞和神经元存活率下降,血栓通注射液加重AAPH造成的SY5Y细胞和神经元损伤,并且呈现剂量依赖性.(2)与对照组相比,OGD组神经元存活率下降,血栓通注射液加重OGD后神经元的损伤,并且呈现剂量依赖性.血栓通注射液影响神经元Hedgehog通路下游效应因子Gli1的表达,神经元OGD条件下,SAG可增加Gli1的表达,cyclopamine和血栓通注射液均抑制Gli1的表达,并且cyclopamine和血栓通注射液均能抑制SAG导致的Gli1的升高.(3)在用βarr2-GFP translocation检测Smoothened(Smo)活性实验中,发现对照组、血栓通注射液组中βarr2-GFP均呈点状聚集分布在细胞质;cyclopamine组βarr2-GFP在细胞质均匀分布.(4)由于血栓通注射液不影响SC8细胞中βarr2-GFP的分布,即不影响Smo的活性.血栓通注射液可能不通过Smo受体来影响Hedgohog信号通路.结论 血栓通注射液加重AAPH氧化应激及OGD后神经元的损伤,其机制可能与抑制Hedgehog通路有关.

神经元;偶氮二异丁脒盐酸盐;氧糖剥夺;血栓通注射液;Hedgehog信号通路;Gli1基因

任文娟;赵晓燕

261300 山东省昌邑市人民医院神经内一科

环球中医药

[1]任文娟;赵晓燕-.血栓通注射液对氧化应激及低氧条件下神经元的抑制作用及机理研究)[J].环球中医药,2022(12):2355-2361

Hedgohog,Azobis,methylpropionamidine,dihydrochl,oride,AAPH+,cyclopamine,arr2

血栓通注射液,低氧,氧化应激损伤,伤及,缺血缺氧,Patched,Smoothened,SY5Y,偶氮二异丁脒盐酸盐,CCK,试剂盒,细胞存活率,胎鼠,皮层,神经元细胞,原代培养,氧糖剥夺,oxygen,glucose,deprivation,OGD+,SAG,激活剂,信号通路抑制剂,实时定量,Gli1,SC8,激光共聚焦显微镜,arrestin,GFP,神经元存活,神经元损伤,剂量依赖,量依赖性,Hedgehog,路下,效应因子,translocation,点状,聚集分布,细胞质,均匀分布,不通

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