目的 观察温阳解郁颗粒(Wenyang Jieyu granule,WYJY)对皮质酮(Corticosterone,CORT)诱导损伤型小鼠海马神经细胞(TH22 cell)的保护作用,基于脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸激酶 B(Tyrosine kinase B,TrkB)/细胞外信号调 节蛋白 激酶(Extra cellular regulated protein kinases,ERK)信号通路探讨WYJY保护海马神经细胞的作用机制.方法 体外构建小鼠海马神经细胞皮质酮诱导损伤模型,以不同浓度的WYJY和氟西汀(Fluoxetine,FXT)含药血清作用于模型细胞,细胞增殖-毒性检测(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法分析细胞活性,倒置显微镜下观察给药前后细胞形态结构的改变,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot)、实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)法检测神经细胞内凋亡因子(BCL2-Associated X,Bax)、抗凋亡因子(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BDNF、Trkb、ERK以及丝氨酸/苏氨酸激酶(Phospho-p90RSK,RSK)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)蛋白表达水平以及相关基因的表达水平.结果 在浓度为459.5 μmol·L-1的CORT作用24 h后,HT22细胞的活性抑制率达到50％,在此条件作用下细胞形态结构损伤明显,凋亡程度严重,细胞上清中BDNF的含量显著减少(P＜0.05),细胞内凋亡相关因子Bcl-2/Bax的比值明显降低(P＜0.01),BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低(P＜0.01);以5％的浓度为2.85 g·kg-1的WYJY和10％的FXT含药血清作用于受损的HT22细胞后,HT22细胞存活率明显提升(P＜0.01),细胞结构的损伤明显改善,细胞凋亡程度减轻,细胞外BDNF的含量显著升高(P＜0.05),细胞内Bcl-2/Bax比值显著上调(P＜0.01),BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平显著提升(P＜0.05,P＜0.01).结论 温阳解郁颗粒可有效保护高浓度CORT造成的小鼠海马神经细胞损伤.调控BDNF/Trkb/ERK通路,放大CREB信号传导,影响Bcl-2、BDNF水平,可能是其保护海马神经元,发挥抗抑郁疗效的重要机制.

温阳解郁颗粒;小鼠海马神经细胞;皮质酮;BDNF/TrkB/ERK信号通路;作用机制

马小娟;孟霜;冯振宇;史敏;王鑫鑫;周晓荣;赵杰

山西省中西医结合医院中心实验室 太原 030013;山西中医药大学研究生院 晋中 030600;山西省中西医结合医院名中医工作室 太原 030013

世界科学技术-中医药现代化

[1]马小娟;孟霜;冯振宇;史敏;王鑫鑫;周晓荣;赵杰-.温阳解郁颗粒调节BDNF/TrkB/ERK信号通路保护皮质酮诱导损伤型海马神经细胞的作用机制研究)[J].世界科学技术-中医药现代化,2022(09):3504-3515

温阳解郁颗粒,Wenyang,Jieyu,WYJY,Corticosterone,TH22,Trkb,p90RSK

BDNF,TrkB,ERK,皮质酮,伤型,granule,CORT,小鼠海马神经细胞,脑源性神经营养因子,Brain,derived,neurotrophic,酪氨酸激酶,Tyrosine,Extra,cellular,regulated,protein,kinases,保护海马,体外构建,损伤模型,氟西汀,Fluoxetine,FXT,含药血清,毒性检测,Cell,Counting,Kit,CCK,细胞活性,倒置,显微镜下,细胞形态,形态结构,蛋白免疫印迹法,Blot,Quantitative,real,qPCR,凋亡因子,BCL2,Associated,Bax,抗凋亡,lymphoma,Bcl,丝氨酸,苏氨酸,Phospho,环磷腺苷效应元件结合蛋白,cAMP,response,element,binding,CREB,蛋白表达水平,HT22,抑制率,此条,结构损伤,上清,相关因子,磷酸化,细胞存活率,细胞结构,神经细胞损伤,信号传导,海马神经元,抗抑郁

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