[目的]探讨黄芪甲苷是否通过上调miR-199a-5p抑制氧糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)诱导的神经干细胞凋亡.[方法]分离14 d胎龄SD大鼠的大脑皮层神经干细胞并鉴定,随机分为正常对照组、模型对照组、黄芪甲苷组、黄芪甲苷+miR-199a-5p拮抗剂组(拮抗剂组)和黄芪甲苷+miR-199a-5p拮抗剂对照组(拮抗剂对照组).除正常对照组外,其余组神经干细胞先行氧糖剥夺8 h,再灌注72 h,拮抗剂组和拮抗剂对照组分别采用脂质体2000转染miR-199a-5p拮抗剂和拮抗剂对照.采用2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐[2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfonic acid benzene)-2H-tetrazole monosodium salt,CCK-8]法检测神经干细胞活性,异硫氰酸荧光素标记磷脂结合蛋白/碘化丙啶(Annexin-fluorescein isothiocyanate isomer/propidium iodide,AnnexinⅤ-FITC/PI)双染法检测神经干细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time qPCR)检测miR-199a-5p表达,免疫印迹法检测切割型半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达.[结果]分离培养的神经干细胞纯度为98.41％,黄芪甲苷能够提高OGD/R损伤的神经干细胞存活率,其中50μmol·L-1黄芪甲苷效果最佳(P<0.01);与模型对照组比较,50μmol·L-1黄芪甲苷能抑制OGD/R损伤的神经干细胞凋亡(P<0.01),上调miR-199a-5p表达(P<0.01),下调cleaved caspase-3蛋白表达(P<0.01),而miR-199a-5p拮抗剂能显著逆转上述效应(P<0.01).[结论]黄芪甲苷能够促进OGD/R损伤的神经干细胞存活,抑制其凋亡,作用机制可能与其上调miR-199a-5p表达,抑制cleaved caspase-3蛋白表达有关.

黄芪甲苷;miR-199a-5p;神经干细胞;氧糖剥夺/再灌注;存活;凋亡

李钰;丁文倩;李琳;许家栋;方燕;杨琰;胡小伟;储利胜

浙江中医药大学基础医学院 杭州 310053

浙江中医药大学学报

[1]李钰;丁文倩;李琳;许家栋;方燕;杨琰;胡小伟;储利胜-.黄芪甲苷上调miR-199a-5p表达抑制氧糖剥夺/再灌注诱导的神经干细胞凋亡)[J].浙江中医药大学学报,2022(05):473-482

disulfonic

黄芪甲苷,199a,5p,表达抑制,制氧,氧糖剥夺,再灌注,神经干细胞,oxygen,glucose,deprivation,reperfusion,OGD,胎龄,大脑皮层,正常对照,+miR,拮抗剂,脂质体,转染,甲氧基,硝基苯,苯基,2H,四唑,钠盐,methoxy,nitrophenyl,acid,benzene,tetrazole,monosodium,salt,CCK,细胞活性,异硫氰酸荧光素,荧光素标记,磷脂,结合蛋白,碘化丙啶,Annexin,fluorescein,isothiocyanate,isomer,propidium,iodide,FITC,实时荧光定量聚合酶链式反应,Real,quantitative,polymerase,chain,reaction,qPCR,免疫印迹法,半胱氨酸蛋白酶,cleaved,caspase,分离培养,细胞存活率,转上

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