目的:探讨泽泻汤(zexie tang,ZXT)抑制肝细胞铁死亡改善非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用机制.方法:50只SPF级雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白对照组、模型组及泽泻汤低(1.3 g·kg-1)、中(2.6 g·kg-1)、高(5.2 g·kg-1)剂量组,每组10只.除空白对照组,其余组小鼠均采用高脂饮食喂养建立NAFLD模型,同时各组灌胃给予10 mL·kg-1相应药物,空白对照组和模型组灌胃等体积的0.5％羧甲基纤维素钠,每天1次,连续9周.免疫组化法检测小鼠肝脏中血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、铁死亡抑制蛋白1(ferroptosis suppressor protein 1,FSP1)的蛋白表达水平;RT-PCR法检测小鼠肝脏FSP1、CoQ10、Nrf2及下游抗氧化基因的mRNA表达水平;硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法检测小鼠肝脏丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平;比色法检测小鼠肝脏还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)的含量;荧光显微镜观察活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平.选择Huh-7细胞及HEK-293T细胞,分为空白组、模型组、特丁基对苯二酚(tert-butylhydro quinone,t-BHQ)组及泽泻汤不同质量浓度(0.25 g·L-1、0.5 g·L-1、0.75 g·L-1、1 g·L-1)组,MTT法检测细胞存活率;mitoSOX探针检测线粒体超氧化物含量;荧光素酶报告基因法检测核因子E2相关因子2(nucle-ar factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)-抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)的转录活性;RT-PCR 法检测FSP1、CoQ10、ACSL4、Nrf2及其下游基因的mRNA表达水平;Western Blot法检测胞浆及核Nrf2蛋白表达水平.结果:ZXT可显著升高FSP1蛋白表达水平(P＜0.05),显著升高FSP1 mRNA、Coq10 mRNA、Nrf2mRNA及其下游抗氧化基因 HO-1 mRNA、GPX4 mRNA、GSS mRNA、GCL mRNA、UGT mRNA、GST mRNA 的表达水平(P＜0.05),剂量依赖性上调Nrf2核蛋白表达量及Nrf2-ARE的转录活性(P＜0.05),显著降低ACSL4 mRNA的表达水平及线粒体超氧化物水平(P＜0.001),显著降低ROS、MDA水平(P＜0.05),显著升高HO-1、GPX4、GSH的水平(P＜0.001).结论:泽泻汤可抑制肝细胞铁死亡改善NAFLD,其作用机制可能与激活Nrf2有关.

非酒精性脂肪性肝病;泽泻汤;氧化应激;铁死亡;Nrf2;小鼠

李二稳;高改;王梦瑶;吴丽敏;谢治深;张振强;王辉;徐江雁

河南中医药大学,河南郑州450046

中医学报

[1]李二稳;高改;王梦瑶;吴丽敏;谢治深;张振强;王辉;徐江雁-.泽泻汤抑制肝细胞铁死亡改善非酒精性脂肪性肝病的作用机制)[J].中医学报,2022(06):1243-1253

zexie,tang,ZXT,butylhydro,mitoSOX,Coq10

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