目的 探究同一来源不同恶性程度的Hepa1-6肿瘤细胞恶性相关基因表达、增殖能力及肿瘤微环境免疫细胞表型的变化.方法 将原始Hepa1-6肿瘤细胞经一次建模获得Hepa1-6-A细胞系,Hepa1-6-A经二次建模获得Hepa1-6-B细胞系.采用qPCR法检测3种细胞系肿瘤恶性相关基因表达水平,采用CCK8法检测3种细胞系体外增殖能力.构建小鼠皮下肿瘤模型,观察3种细胞系体内成瘤能力.通过流式细胞术检测Hepa1-6-A和Hepa1-6-B肿瘤组织免疫细胞亚群组成与功能表型差异以评价免疫抑制性.结果 qPCR结果显示,与Hepa1-6细胞相比,Hepa1-6-A、Hepa1-6-B细胞中己糖激酶2、B淋巴细胞瘤-2 mRNA表达水平显著增高(F=22.557、34.604,q=6.658～12.327,P<0.05);此外,与Hepa1-6和Hepa1-6-A细胞相比,Hepa1-6-B细胞中波形蛋白、碱性螺旋环螺旋转录因子、细胞周期蛋白B1及巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达水平显著增高(F=10.897～195.234,q=4.692～22.190,P<0.05).CCK8实验结果显示,与Hepa1-6和Hepa1-6-A细胞相比,Hepa1-6-B细胞体外增殖能力更强(F=645.459,q=37.585、40.357,P<0.05).小鼠肿瘤模型显示,Hepa1-6-B细胞体内成瘤速度显著高于Hepa1-6-A细胞(F时间=26.977,F组别=127.599,F交互=4.613,P<0.05),Hepa1-6-B组肿瘤第16天肿瘤质量明显高于Hepa1-6和Hepa1-6-A组肿瘤(F=18.898,q=6.379、8.099,P<0.05).与Hepa1-6-A组肿瘤组织相比,Hepa1-6-B组肿瘤组织中单核细胞比例明显降低(t=4.032,P<0.05),但巨噬细胞比例明显升高(t=2.929,P<0.05),特别是促肿瘤型CD163+巨噬细胞与CD206+巨噬细胞比例明显升高(t=2.619、2.870,P<0.05),且CD163+巨噬细胞与CD206+巨噬细胞比例和肿瘤体积呈正相关(r=0.669、0.736,P<0.05).同时,与Hepa1-6-A组肿瘤组织相比,Hepa1-6-B组肿瘤组织Ⅱ型干扰素(IFNγ)、颗粒酶B表达水平均显著降低(t=2.358、3.076,P<0.05),IFNγ+CD8+T/Treg明显降低(t=2.430,P<0.05),程序性死亡受体1(PD-1)表达水平显著升高(t=3.693,P<0.05).无论是Hepa1-6-A组肿瘤还是Hepa1-6-B组肿瘤,PD-1+CD8+T细胞比例与肿瘤体积均无明确相关性.结论 经二次体内成瘤后,Hepa1-6-B肿瘤细胞恶性相关基因表达水平显著增高,体外增殖能力与体内成瘤速度明显提升,同时增强了肿瘤微环境的免疫抑制性,从多角度提升了肿瘤细胞的恶性程度.

肿瘤;实验性;肿瘤分级;肿瘤微环境;肿瘤浸润;髓系细胞;淋巴细胞;巨噬细胞;癌基因

徐夕冶;柳迪;唐丽

青岛大学基础医学院,山东 青岛 266071;军事科学院军事医学研究院生命组学研究所

精准医学杂志

[1]徐夕冶;柳迪;唐丽-.同一来源不同恶性程度的Hepa1-6肿瘤细胞恶性相关基因表达、增殖能力及肿瘤微环境免疫细胞表型变化比较)[J].精准医学杂志,2022(03):228-233,238

一来,恶性程度,Hepa1,肿瘤细胞,相关基因表达,肿瘤微环境,细胞表型,细胞系,二次建模,qPCR,基因表达水平,CCK8,体外增殖能力,肿瘤模型,体内成瘤,过流,流式细胞术,肿瘤组织,免疫细胞亚群,亚群组,功能表,表型差异,免疫抑制,抑制性,己糖激酶,中波,波形蛋白,细胞周期蛋白,B1,巨噬细胞集落刺激因子,细胞体,组别,单核细胞,瘤型,CD163+,CD206+,肿瘤体积,干扰素,IFN,颗粒酶,Treg,程序性死亡受体,1+CD8+T,实验性,肿瘤分级,肿瘤浸润,髓系细胞,癌基因

0.215794