目的 建立小鼠胎肝基质细胞系AFT024细胞与人胚胎干细胞(hESC)来源造血祖细胞共培养体系,探究AFT024细胞对hESC来源造血祖细胞体外特性维持和扩增作用.方法 建立hESC向造血祖细胞定向诱导分化的培养体系,采用拟胚体诱导方法,分三阶段添加不同细胞因子获得造血祖细胞,将hESC来源造血祖细胞与AFT024细胞进行共培养,对照组为无滋养层培养组.培养4d后,通过细胞计数、流式细胞术分析、集落培养实验等检测造血祖细胞数量、比例及造血集落形成能力的变化;通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对造血干/祖细胞增殖和分化相关基因的表达水平进行检测,以确定AFT024是否具有体外维持造血祖细胞特性的能力.结果 hESC经三阶段诱导培养14后,可分化并产生大量悬浮的造血祖细胞,CD34+CD43+细胞比例为(22.63±2.65)％,CD34+CD45+细胞比例为(23.67±2.15)％;免疫荧光染色结果显示,AFT024细胞中有α-平没肌肌动蛋白(α-SMA)及Dlk-1蛋白的表达,以其为滋养层与造血祖细胞共培养4d后,造血祖细胞比例显著高于无滋养层培养组.造血集落形成实验结果显示,滋养层培养组产生的造血集落总数显著高于无滋养层组.结论 AFT024对hESC来源造血祖细胞的体外特性具有一定的维持作用.

人胚胎干细胞;造血祖细胞;AFT024细胞;体外特性维持

朱美琪;张博文;吴旭敏;李基晟;宋妃灵;范增;何丽娟;裴雪涛;李艳华

军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京 100850;华南生物医药研究院华南干细胞与再生医学研究中心,广州510005;贵州大学药学院,贵阳 550000;军事科学院军事医学研究院卫生勤务与血液研究所,北京 100850

军事医学

[1]朱美琪;张博文;吴旭敏;李基晟;宋妃灵;范增;何丽娟;裴雪涛;李艳华-.AFT024细胞对人胚胎干细胞来源造血祖细胞的体外维持作用研究)[J].军事医学,2022(08):561-568

AFT024,体外特性维持,CD34+CD43+,CD34+CD45+,Dlk

人胚胎干细胞,造血祖细胞,基质细胞,细胞系,hESC,细胞共培养,共培养体系,细胞体,诱导分化,拟胚体,滋养层,4d,过细,流式细胞术,细胞数量,集落形成,形成能,qRT,诱导培养,免疫荧光染色,染色结果,肌动蛋白,SMA

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